论文部分内容阅读
浙江雪胆Hemsleyazhejiangensis为1985年发表的雪胆属新种,其分布区域狭窄,多生于竹林下,极易受人为因素干扰,种群稳定性低,因而数量稀少,资源十分有限。对浙江雪胆的研究,目前仅在药用成分、群落学和组织培养等领域有少量的报导,且研究范围狭小。本研究从资源开发利用的角度出发,对浙江雪胆生长的群落结构、遗传多样性特征、主要有效成分的分离测定、药品质量的鉴定和快繁等关键技术层面,开展了基础雨系统的工作。主要研究结果如下: 1、浙江雪胆生境研究结果:对浙江雪胆分布的6个群落样地调查分析,浙江雪胆居群分布在海拔250-1400m的竹林下,生境大多是人类活动频繁的区域。其分布区类型为热带与温带边缘,且温带气候对其影响较大,说明其适宜在温度不高的环境中生长。浙江雪胆在群落中重要值小,优势度低,只有乌岩岭2号样地形成优势种,其余居群的重要值均在0.1以下。群落植物组成分单一,物种丰富度和多样性指数较低,群落稳定性差,只有龙游的两个样地的丰富度指数在10.0以上。各个群落之间属和种的相似性程度均不高,群落亲缘性小,生境的异质性大。生境土壤的含水率较大,但过高和过低的含水率均会对浙江雪胆的生长造成影响。浙江雪胆居群的生存受到严重的威胁,因此急需保护现有居群,防止这一珍稀物种的灭绝。 2、浙江雪胆遗传多样性研究结果:对浙江雪胆5个居群56个个体的SSR-PCR实验,统计分析表明:浙江雪胆物种遗传多样性水平较低Ht=0.4144、Hs=0.2810,泰顺乌岩岭的两个居群和左溪的居群遗传多样性水平相对较高,江西武功山最低。Neis基因分化系数GsT=0.3219,同时AMOVA分析得到67%的遗传变异发生在居群内,来自居群间的变异只有33%,表明居群内的遗传变异是浙江雪胆遗传变异的主要来源。聚类分析表明,泰顺乌岩岭的两个居群聚1个分支,并同产自泰顺的左溪居群聚合,而地理分布距离相对较远的龙游居群和武功山居群则与泰顺的3个居群聚于不同分支上,表明地理距离决定遗传距离。 3、浙江雪胆成分及质量研究结果:对浙江雪胆不同产地、不同年份和不同季节的块茎样品,以及2012年夏季的根、茎、叶样品和秋季中华雪胆块茎样品,进行水分、醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量的检测,并进行显微观察。结果表明:总皂苷含量随块茎个体质量增加先增后减,质量达到594.06g时,总皂苷含量最高。不同产地活性成分含量差异显著,总皂苷含量乌岩岭>武功山>左溪>龙游,总多糖含量乌岩岭>左溪>龙游>武功山。不同年份间醇溶性浸出物和总皂苷含量稳定,但总多糖含量差异显著,2012年高于2013年。在不同的季节中,秋季各活性成分含量最高,为最佳采收季节。不同的营养器官成分含量测试,块茎醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量均最高,夏季的叶片也有较高含量的醇溶性浸出物和总皂苷。浙江雪胆醇溶性浸出物和总多糖含量高于中华雪胆,但总皂苷含量相对较低。建议设置浙江雪胆原药料的标准为:水分含量低于10%,灰分含量低于5.5%,醇溶性浸出物含量不低于25%,总皂苷含量不低于1.1%,总多糖含量不低于28.5%。 4、浙江雪胆快繁技术研究结果:浙江雪胆的扦插繁殖的实验结果表明,用GGR生根粉浸泡后的扦插条,比无菌水对照组的存活率高。但总体上扦插方式繁殖的浙江雪胆成活率低、生长缓慢、适应能力差,并不适合推广应用。在切块繁殖时,50-100 g的切块质量均为理想切块质量,NAA溶液浸泡块茎对于其出芽和生长作用不显著。浙江雪胆块茎切块繁殖成活率很高,且操作简单,易于掌握,非常适合在农业生产中推广。以叶片、叶柄、具芽茎段和块茎为外植体的组织培养实验表明,块茎含有内生菌,叶片和叶柄能较为轻易的诱导出愈伤组织,但较难进一步诱导丛生芽的分化,因此这3个器官均不适合作为组织培养的外植体。具芽茎段虽然愈伤组织的诱导率较低,但其在继代后诱导丛生芽率和单位个体形成丛生芽数均较高。