水稻作为一种重要的粮食作物,其产量受到各种病虫害的严重影响。蚜虫对我国水稻产量影响很大,70年代后,逐渐成为重要稻虫,提高水稻对蚜虫的抗性具有重要的意义。蚜虫的防治中,植物凝集素常被用于生物防治。同时它也是迄今为止发现的最大的凝集素家族,其中豆科植物凝集素是植物凝集素中最丰富,也是研究最多的凝集素。植物凝集素对大多数昆虫的生长繁殖具有抑制甚至毒杀作用。本实验室前期通过群体遗传学分析方法,筛选到与大豆驯化相关基因中,出现编码豆科凝集素的相关基因。本实验利用RT-PCR技术从大豆栽培品种浙江苞萝黄中克隆了豆科凝集素基因,命名为Le4(GenBank:FJ997345.1)。本研究旨在将编码豆科凝集素的基因Le4转化水稻,通过对转基因植株抗蚜虫的表型分析,评价该基因在水稻抗虫中的应用价值。本文主要结果如下:1.利用TRIzol法提取大豆叶片RNA,通过RT-PCR技术获得了Le 基因的cDNA片段,并进行了测序,Blast结果表明成功获得Le4基因片段。2.成功构建原核表达载体pET28a-Le4,经western blot检测证明Le4蛋白在BL21表达菌中成功,室内虫试法鉴定表明pET28a-Le4转化子蛋白对蚜虫生长繁殖具有抑制作用。3.初步摸索了麦长管蚜的培养方法,该蚜虫以新鲜小麦或水稻幼苗为食,其培养条件为22℃,光照16:8(L:D),湿度40%。4.利用转基因载体pCXUN,成功构建了转基因载体pCXUN-Le4,利用农杆菌介导的方法,将重组表达载体pCXUN-Le4转化水稻品种中花11,并获得了50株T0代Le4转基因水稻植株。利用RT-PCR技术对部分T0代植株进行了Le4表达分析,鉴定了 4株高表达量的Le4转基因植株。