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本文针对目前抗癌药物存在的选择性差、毒副作用大、药物释放不可控等问题，采用碱性蛋白酶水解菜籽蛋白提取具有抗肿瘤活性的两亲性菜籽肽，并结合纳米技术，制备了一种载药型菜籽肽自组装纳米载体，这种载体可以提高药物的负载能力，减少药物毒性，通过靶点滞留效应增强药物在靶点部位的累积，实现药物可控、精准释放，为癌症治疗提供一种新的治疗策略。具体研究结果如下：
1、两亲性菜籽抗肿瘤肽的分离纯化及结构鉴定。采用超滤、凝胶色谱层析和半制备高效液相色谱对碱性蛋白酶水解物进行逐级分离纯化，并采用Triple-TOFMS/MS进行序列鉴定，根据目标肽的序列采用DNAstar、ExPASy等分析目标肽两亲性，并结合MTT比色法检测目标肽体外抗肿瘤活性。结果表明，膜分离＜1kDa组分最终分离得到的A1-3具有较好的抗肿瘤活性，主要含有6条目标肽，分别是DHHAPQL、SVIRPPL、GVIRPPL、NDGNQPL、THPGVAQ和VTDGEAH。其中，SVIRPPL具有最好的抗肿瘤活性，其对HepG2、MKN-28、A549和MCF-7细胞作用的IC50分别为0.78、1.07、1.31和1.45mM。
2、两亲性菜籽肽自组装纳米载体的构建及抗肿瘤活性研究。采用超声-溶剂挥发法制备两亲性菜籽肽纳米载体并对其进行表征分析及抗肿瘤活性评价。研究发现，纳米载体主要为球形颗粒，粒径大小在160~200nm，PDI＜0.3；与菜籽肽相比，纳米载体的抗肿瘤活性有明显提高，其中SVIRPPL/NP抗肿瘤活性最好，其对HepG2、MKN-28、A549和MCF-7细胞作用的IC50分别为0.57、0.81、0.97和1.10mM。
3、菜籽肽-HCPT/NP纳米载体的构建及抗肿瘤机理研究。采用超声-溶剂挥发法构建负载HCPT的菜籽肽自组装纳米载体并进行表征分析，结果发现菜籽肽-HCPT/NP纳米载体主要为粒径160~200nm，PDI＜0.3的球形颗粒；与HCPT和SVIRPPL/NP相比，SVIRPPL-HCPT/NP抗肿瘤活性显著提高，对HepG2、MKN-28、A549和MCF-7细胞作用的IC50分别为0.17、0.18、0.25和0.27μM，通过体外释放实验、细胞摄取及细胞器分布研究，明确SVIRPPL-HCPT/NP可通过网格蛋白依赖性内吞途径进入细胞并转运至溶酶体，通过CathB降解，促进HCPT转运与释放。采用流式细胞术研究SVIRPPL-HCPT/NP诱导细胞凋亡机制，结果表明SVIRPPL-HCPT/NP作用后线粒体膜电位下降(31.12%)，诱导细胞在早期发生凋亡，说明SVIRPPL-HCPT/NP可以通过线粒体途径诱导细胞凋亡并协同HCPT增强抗肿瘤活性。
1、两亲性菜籽抗肿瘤肽的分离纯化及结构鉴定。采用超滤、凝胶色谱层析和半制备高效液相色谱对碱性蛋白酶水解物进行逐级分离纯化，并采用Triple-TOFMS/MS进行序列鉴定，根据目标肽的序列采用DNAstar、ExPASy等分析目标肽两亲性，并结合MTT比色法检测目标肽体外抗肿瘤活性。结果表明，膜分离＜1kDa组分最终分离得到的A1-3具有较好的抗肿瘤活性，主要含有6条目标肽，分别是DHHAPQL、SVIRPPL、GVIRPPL、NDGNQPL、THPGVAQ和VTDGEAH。其中，SVIRPPL具有最好的抗肿瘤活性，其对HepG2、MKN-28、A549和MCF-7细胞作用的IC50分别为0.78、1.07、1.31和1.45mM。
2、两亲性菜籽肽自组装纳米载体的构建及抗肿瘤活性研究。采用超声-溶剂挥发法制备两亲性菜籽肽纳米载体并对其进行表征分析及抗肿瘤活性评价。研究发现，纳米载体主要为球形颗粒，粒径大小在160~200nm，PDI＜0.3；与菜籽肽相比，纳米载体的抗肿瘤活性有明显提高，其中SVIRPPL/NP抗肿瘤活性最好，其对HepG2、MKN-28、A549和MCF-7细胞作用的IC50分别为0.57、0.81、0.97和1.10mM。
3、菜籽肽-HCPT/NP纳米载体的构建及抗肿瘤机理研究。采用超声-溶剂挥发法构建负载HCPT的菜籽肽自组装纳米载体并进行表征分析，结果发现菜籽肽-HCPT/NP纳米载体主要为粒径160~200nm，PDI＜0.3的球形颗粒；与HCPT和SVIRPPL/NP相比，SVIRPPL-HCPT/NP抗肿瘤活性显著提高，对HepG2、MKN-28、A549和MCF-7细胞作用的IC50分别为0.17、0.18、0.25和0.27μM，通过体外释放实验、细胞摄取及细胞器分布研究，明确SVIRPPL-HCPT/NP可通过网格蛋白依赖性内吞途径进入细胞并转运至溶酶体，通过CathB降解，促进HCPT转运与释放。采用流式细胞术研究SVIRPPL-HCPT/NP诱导细胞凋亡机制，结果表明SVIRPPL-HCPT/NP作用后线粒体膜电位下降(31.12%)，诱导细胞在早期发生凋亡，说明SVIRPPL-HCPT/NP可以通过线粒体途径诱导细胞凋亡并协同HCPT增强抗肿瘤活性。