【摘 要】
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该研究对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在36kDa附近有一条蛋白带的差别.由此推测实验的胡萝卜品种
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该研究对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在36kDa附近有一条蛋白带的差别.由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中的抗冻蛋白(AFP)表达.参考Dawn Worrall 和Knut Meyer等的研究结果,以胡萝卜功苗基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了长1099bp的抗冻蛋白基因.将此抗冻蛋白基因克隆进大肠杆菌表达载体pGEX4T1,在IPTG的诱导下表达出约60kDa的融合蛋白,据此推测克隆到AFP基因可以编码完整的约34kDa的抗冻蛋白.进一步把此抗并蛋白基因与CaMV 35S启动子一起克隆进双元载体pCAMBIA2300,转化烟草NC82,获得了具有卡那霉素抗性的转化植株.PCR和Southern检测的结果表明此基因已经整合到烟草的基因组中,RT-PCR和总蛋白分析的结果表明转入的抗冻蛋白基因获得了表达.宏观的冷处理实验中,转基因烟草的抗寒能力明显强于普通烟草植株.这表明我们克隆到的AFP基因可以通过基因工程的方法改良植物的抗寒性能,具有很好的应用前景.
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