论文部分内容阅读
雌激素在体内的生理作用通过雌激素受体(EstrogenReceptor，ER)ERβ和ERα的介导来实现调控。雌激素受体在细胞核和细胞质中均有分布。研究表明ERa能刺激细胞分裂和生长，ERβ能拮抗ERα的活性。ERβ在乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、和卵巢癌的发生、发展过程中具有调控作用。文献报道mRNA的3’非翻译区（3UTR）序列异常容易导致癌症的发生。mRNA的3UTR有许多调控元件能调控mRNA的翻译，mRNA的稳定性及在细胞中的定位。这些调控元件能与蛋白质或蛋白质复合物结合。mRNA3’UTR通过RNA结合蛋白和microRNA来实现其对基因表达的调控。我们以ERβmRNA3UTR为研究对象，探索真核生物mRNA非翻译区的调控机制。本实验前期通过RNA沉降技术得到两种与ERpmRNA3UTR特异性结合的蛋白:Vigilin和ILF3。Vigilin是一个高度保守的，含有14个RNA结合结构域（KH结构域）的蛋白。ILF3是RNA结合蛋白中的一员，能与富含AU序列的mRNA结合，调控基因表达。Vigilin和ILF3蛋白都参与基因调控，如RNA转录、RNA剪切、RNA编辑、RNA出核转运等。研究Vigilin、ILF3和ERβ的调控关系对了解ERβmRNA3UTR在雌激素信号传导途径的作用机制有重要的意义。
本实验通过凝胶阻滞实验(EMSA)和Dual-Iuciferase实验证明了Vigilin和ILF3能特异的结合于ERpmRNA3UTR。雌激素受体可介导雌激素实现其功能，Vigilin和ILF3蛋白可能通过与ERβ结合，参与雌激素信号通路的调控。为探讨他们与雌激素受体的关系以及调控机制，我们构建Vigilin过表达和低表达的细胞稳定株，ILF3过表达的细胞株稳定株，通过WestemBlot检测ERβ蛋白的表达情况。在蛋白水平上，ERβ蛋白的表达量随着Vigilin蛋白量的升高而降低，当Vigilin表达被抑制时，ERβ的表达量升高。Vigilin蛋白对ERβ基因的表达起负调控作用，对Erα基因的表达起正调控。而ILF3表达量升高时，ERβ的表达量也升高，表明ILF3蛋白对ERβ基因的表达起正向调控。通过结晶紫染色实验检测Vigilin蛋白对MCF-7细胞活力的影响。本实验研究为更深入地探索雌激素信号通路提供了新的依据。