肠道菌群DNA提取与鉴别技术研究

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随着粪菌移植在临床上的广泛应用,使得肠道菌群的研究热度不断提高,肠道菌群在人体代谢活动中所起的作用,以及其组成功能等,已成为国内外学者关注的焦点。其在临床上治疗难治性肠病效果不断得到认证,且肠道菌群被证明和人体诸多疾病有密切联系。在研究分析肠道菌群以及理应肠道菌群进行疾病治疗的时候,通过何种方法提取获得完整的肠菌,是正确认识肠道菌群的先决条件。目前,普遍的提取肠道菌群的方法是从粪便样品中进行分离,然而粪便样品中的组份十分的复杂,除包含有肠道菌群外,还包含有各类蛋白质有机物、各类无机盐、各类纤维素、食物未消化完全残渣、肠道内壁脱落细胞等。因此,在提取肠道菌群或是肠道菌群DNA时,需要对粪便样品进行一些预处理操作,通过预处理保证提取浓度的同时提高其纯度。通过测序以及DGGE电泳等对肠道菌群DNA进行检测所需时间长,操作繁琐;光谱法作为一种纯物理的光学方法,检测快速,操作简便,可以达到对肠道菌群DNA进行检测和鉴别的目的。本文利用正交分析方法对影响肠道菌群DNA提取纯度和浓度的各条件:样品与生理盐水比例、离心速度、离心时间、离心次数进行了综合全面地分析研究,得出了肠道菌群DNA提取纯度和浓度随各因素条件改变的变化趋势;得出了各因素对肠道菌群DNA提取纯度和浓度影响的先后次序;建立了一种最优的提取肠道菌群DNA的预处理方法。对于不同物种的肠道菌群DNA,利用光谱法一次检测即可得到紫外全波段的吸光度信息。通过主成分分析方法利用主成分得分值,结合欧氏距离对不同物种的肠道菌群DNA进行分类,例如人、猫、狗、兔,验证了光谱法对不同物种肠道菌群DNA进行分类鉴别的可行性。通过正交分析方法建立一种优化肠道菌群DNA提取预处理方法,能够得到高纯度、高浓度的DNA;利用主成分和聚类分析方法对不同物种肠道菌群DNA进行鉴别分类。为肠道菌群或是肠道菌群DNA的提取和检测鉴别技术提供一定的参考。
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