论文部分内容阅读
目的： 鼻咽癌高发于我国华南地区，EB病毒、环境和遗传因素被认为是鼻咽癌发病的主要原因。鼻咽癌患者多数发病隐匿，临床确诊时常伴有淋巴转移，少数有远处转移；虽经放疗和/或化疗综合治疗但常常预后较差。OPN及其基因多态性与多种肿瘤发生、发展相关；也有少数研究发现鼻咽癌患者OPN高表达，我们前期研究也证实OPN基因在鼻咽癌患者高表达，且部分位点多态性与OPN发病风险相关。因此，本论文以鼻咽癌高发区域的广西壮族鼻咽癌患者外周血、癌组织及细胞株为研究对象，从蛋白表达、基因转录水平及临床病理参数等系统研究OPN基因及其多态性在鼻咽癌中发生、发展中的分子机制及临床意义，从而为鼻咽癌个体化精准诊疗探索出新的治疗靶点。 方法及结果： 1.利用ELISA法检测鼻咽癌患者以及健康人外周血中OPN蛋白表达水平，发现鼻咽癌患者血浆平均OPN水平显著高于健康对照组；鼻咽癌患者血浆中OPN在不同临床分期和有无淋巴结转移平均表达水平有显著差异；高表达OPN水平的鼻咽癌患者生存时间较低表达者显著缩短。 2.利用RT-PCR法和Western blot法检测5株鼻咽癌细胞株（5-8F、CNE-1、CNE-2、SUNE-1、HONE-1）和正常鼻咽细胞株中OPN mRNA和蛋白表达水平；发现与NP69相比，5-8F、CNE-2、HONE-1三株细胞OPN mRNA表达均显著上调；5-8F、CNE-2、SUNE-1三株细胞OPN蛋白表达显著上调。 3.利用免疫组织化学法和RT-PCR法检测鼻咽癌和慢性鼻咽炎组织中的OPN及其mRNA表达水平；发现OPN在癌组织的阳性表达率高于鼻咽炎组织；出现淋巴或远处转移患者的OPN表达水平显著升高；癌组织中OPN高表达组患者的生存时间较低表达组明显缩短。 4.利用SNaPshot SNP分型技术分析广西壮族人群健康人外周血样本4个OPN位点的基因型，发现广西壮族人群中OPN rs4754、rs1126772、rs9138、rs4754位点基因型和等位基因分布频率与欧洲人群、中国汉族人群、非洲人群、日本人群存在不同情况的差异。其中广西壮族人群OPN rs1126772基因型和等位基因分布频率与欧洲人群、中国汉族人群、非洲人群、日本人群比较均有显著差异。 5.利用SNaPshot SNP分型技术检测鼻咽癌患者和健康人群外周血OPN基因rs11730582、rs1126772、rs9138、rs4754的基因型，发现rs11730582CC+CT和CT基因型与鼻咽癌易感性相关，rs11730582在鼻咽癌不同临床分期和淋巴结转移方面存在显著差异，且OR值均小于1.0，提示rs11730582CC基因型为鼻咽癌的保护因素。 6.分析鼻咽癌患者OPN rs11730582,rs1126772,rs9138,rs4754位点多态性和血浆OPN的水平之间的关系，rs11730582CC和CT基因型患者的血浆OPN水平低于TT基因型的患者；rs1126772,rs9138,rs4754基因型的血浆OPN水平比较无显著差异。 7.分析鼻咽癌和健康对照人群OPN基因4个位点间的单体型分析，发现rs11730582、s1126772、rs9138、rs4754构建的T-A-A-C单体型可降低鼻咽癌的发病风险。 8.利用质粒构建rs11730582野生型与突变型克隆载体质粒，通过双荧光素酶实验验证其对OPN表达的下调功能。 结论： 1.OPN在鼻咽癌发生、发展过程中表达显著升高；其表达增高与鼻咽癌的侵袭、转移密切相关；OPN高表达患者预后较差。 2.广西壮族人群中OPN rs4754、rs9138、rs11730582位点多态性与其他种族人群存在一定的差异；OPN rs1126772位点与欧洲、非洲、日本、汉族人群均有差异，可能是广西壮族人群特有的突变。 3.证实了rs11730582与鼻咽癌的发病存在密切相关性；rs11730582SNP可下调OPN表达，降低鼻咽癌发病风险；及其与rs1126772、rs9138、rs4754构建的T-A-A-C单体型也可降低鼻咽癌的发病风险。