利用酵母双杂交系统筛选与mPem蛋白相作用的分子

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  Pem基因是同源异型框基因,它的表达具有明显的时间和组织特异性。鼠胚发育的第6天,Pem开始在胚胎中表达,第7-8天,Pem表达量达到最高,随后迅速减少;而在胎盘和卵黄囊中,第7-8天时几乎检测不到Pem的转录,到了第9天大量表达并持续到分娩为止。Pem基因在成年组织中一般不表达,但可在生殖组织中表达,例如在附睾、睾丸和卵巢中表达。这充分表明Pem在胚胎发育和生殖组织中可能充当着重要的角色。  为了进一步研究Pem的功能,我们利用酵母双杂交系统对小鼠7天胚胎cDNA文库进行筛选,成功的得到了3个有意义的分子:Psap、Brpf1、Cdc37。  Brpf1基因(bromodomain and PHD finger containing 1)含有1个保守的溴结构域(bromodomain)、两个PHD锌指结构和1个PWWP模序。经过初步的生物信息学分析,我们推测:在胚胎发育的特定阶段和生殖组织中,mPem特异性表达。在mPem形成特定的空间结构后,Brpf1的第一个PHD锌指结构与mPem结合,两者发生相互作用,从而使Brpf1的另一个PHD锌指结构和bromodomain与核小体结合,构象发生变化的核小体募集转录相关蛋白与DNA模板上启动子结合,促进基因转录,最终导致细胞分化或其他一系列事件的发生。  Psap(Prosaposin)基因的表达与mPem的表达在空间上相吻合,他们可能在雄性生殖器官的发生、细胞分化中起着举足轻重的作用。  mPem蛋白与Cdc37伴侣蛋白的相互作用的鉴定,说明mPem的空间构象对于其功能非常重要。在Cdc37的帮助下,mPem形成正确的空间结构,进一步行使其功能。
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