癫痫发作是由于脑神经元过度同步放电导致突发性、短暂性脑功能异常而引起的一种临床综合征,其病理机制十分复杂。癫痫发作可以导致脑内多种凋亡相关基因的表达和神经元的凋亡,其中以海马神经元凋亡最显著,这可能是导致癫痫患者后期认知功能障碍和情感障碍的原因之一。　　本实验室前期研究发现,癫痫发作可导致海马产生过量NO,后者对海马神经元具有兴奋毒性作用。那么,癫痫发作后的细胞凋亡是不是与过量产生的NO有关呢?这一推测还没有得到直接证实。因此,本实验拟以 iNOS的特异性抑制剂AG预处理海人酸致痫大鼠,降低癫痫大鼠脑内NO含量,以凋亡相关因子bcl-2、bax和Apaf-1为检测指标,探讨降低脑内NO含量对癫痫模型大鼠海马神经元相关凋亡因子的影响,为癫痫的临床治疗提供实验依据。　　离体和在体实验均分为4组:生理盐水对照组(NS组),海人酸致痫组(KA组),氨基胍预处理+海人酸组(AG+KA组)和氨基胍组(AG组)。离体实验中,本课题采用新生 SD大鼠,取海马神经元培养,获取纯化的神经元,再分别以 KA(200μmol/L)、AG(NOS抑制剂)+KA、单独AG(200μmol/L)作用于神经元,然后采用免疫细胞化学法显示在不同处理因素作用24h和48h后bcl-2、bax的免疫反应性。在体实验中,本课题采用SD雄性大鼠80只,KA组侧脑室注射KA(2μg/kg)以致痫,NS组注射等容量的生理盐水,AG+KA组于侧脑室注射 KA前按照100mg/(kg.24h)的量连续腹腔注射AG3d预处理,AG组于注射NS前连续腹腔注射 AG3d。各组大鼠在造模后观察其行为学变化2小时左右;并于存活24h和48h两个时间点分批处死动物,一部分灌流取脑,石蜡包埋切片,做 bcl-2和bax的免疫组织化学染色;另一部分直接取新鲜海马组织,采用Western blot法或半定量RT-PCR法检测各组大鼠bcl-2、bax蛋白及Apaf-1 mRNA的表达情况。　　结果显示,在离体实验中,在24和48h两个时间点,KA组bcl-2的免疫反应较NS组减弱而bax的免疫反应增强;AG+KA组bcl-2的免疫反应较KA组增强而bax的免疫反应减弱;AG组与NS组相比无明显差异。在体实验中,NS组大鼠无癫痫发作行为;KA组大鼠癫痫发作达Ⅳ～Ⅴ级,可持续1-2h;AG+KA组大鼠癫痫发作强度较KA致痫组明显减弱,为Ⅱ～Ⅲ级。bcl-2/bax的免疫组织化学结果与离体实验结果相似。Western Blot结果显示:大鼠海马组织bcl-2和bax蛋白的表达水平呈负相关。其趋势与离体实验结果相似。半定量RT-PCR法显示Apaf-1 mRNA的含量在造模后24h和48h时间点,KA组明显高于NS组(P<0.05),而AG预处理则明显拮抗KA诱导的Apaf-1 mRNA高表达。　　上述研究结果提示,KA致痫能诱导大鼠海马神经元促凋亡因子升高,抗凋亡因子降低;而AG预处理能降低脑内NO含量进而拮抗这种效应。由此提示,癫痫发作产生的神经元凋亡与NO的过量产生可能有密切关系,因此,降低癫痫发作时NO的含量可发挥神经保护作用,这对于临床癫痫防治及神经保护具有重要的启示作用。