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前列腺癌是男性最常见的肿瘤之一,发病率在全球男性恶性肿瘤位于第二位,其死亡率位于第五位。根据美国肿瘤统计报告,前列腺癌占所有新发癌症病例的27%,在癌症相关死亡率中占11%。此前研究表明,雄激素受体是驱动前列腺癌进展的关键因素之一。因此,阻断雄激素合成或抑制其与雄激素受体结合的雄激素阻断疗法仍然是局部晚期中高风险前列腺癌以及转移性前列腺癌的主要治疗方案。但是,对此治疗方案产生的耐药性是难以避免的,主要因为雄激素受体在循环体液缺乏雄激素的情况下,仍然可以继续驱动肿瘤生长,这导致有10-50%前列腺癌患者在确诊后三年内持续进展为去势抵抗性前列腺癌,并且几乎所有前列腺癌相关不良事件均发生于此阶段。伴随着中国人口老龄化加剧和生活饮食习惯趋向西方化,近十年来我国前列腺癌的发病率和死亡率日趋升高,前列腺癌患者的医疗负担也逐渐加重。因此,探索在疾病早期能够发现诊断前列腺癌的分子标记物和治疗靶点,并加强对前列腺癌发病机制的研究,对于改善患者生存预后和减轻患者医疗负担尤为重要。随着基因测序技术的不断完善,研究发现在人类的基因组中,只有约2%的基因能够编码蛋白质,其他基因大部分被转录为非编码RNA。长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA。近几年,研究发现大量有功能的lncRNA,其分子功能主要包括调控基因转录、翻译修饰、表观遗传学修饰、调节细胞增殖、细胞凋亡和细胞分化等。在lncRNA调节表观遗传学修饰中,位于胞质内的lncRNA常常以竞争性内源性RNA的方式与miRNA结合,调控转录产物的降解和翻译,进而参与肿瘤细胞恶性进展。在前期实验中,我们通过TCGA-PRAD和GSE70770数据库中前列腺癌组织转录组数据和临床信息,筛选差异性表达的lncRNAs、miRNAs和mRNAs并在前列腺癌细胞系中验证,发现lncRNA SNHG5（SNHG5）在前列腺癌中高表达,且与临床不良预后相关,提示SNHG5可能与前列腺癌进展密切相关。SNHG5定位于人类染色体6q14.36,最先在胃癌中被报道表达异常,并且参与调控乳腺癌、肾透明细胞癌和肝细胞癌的恶性进展,但是SNHG5在前列腺癌的作用尚不清楚。据此,本研究首先在前列腺癌组织和细胞系中检测SNHG5表达情况,分析其与临床预后的关系,随后在核质分离实验中明确SNHG5的亚细胞定位,通过体内外分子生物学实验探索SNHG5对前列腺癌细胞生物学功能的影响,并借助在线数据库预测与SNHG5作用的靶分子,并在双荧光素酶报告基因实验中对预测结果进行验证。最后,结合生物信息学分析和回复实验进一步探索SNHG5在前列腺癌恶性进展的作用机制,为寻找前列腺癌诊断预后标记物和治疗靶点提供思路。第一部分 SNHG5在前列腺癌中的表达以及临床意义目的:借助TCGA和GEO数据库筛选在前列腺癌中异常表达的lncRNAs,并在前列腺癌组织和细胞系中验证,分析其与临床预后的相关性。方法:（1）通过TCGA-PRAD和GSE70770数据筛选在前列腺癌差异表达的基因,并根据在线数据库网站（starBase、miRcode、miRDB、TargetScan）预测的分子相互作用关系构建ceRNA调控网络;（2）借助Kaplan-Meier生存分析筛选出与生存预后相关lncRNAs和miRNAs;（3）通过RT-qPCR验证SNHG5在前列腺癌组织和细胞的表达水平;（4）借助在线数据库RNAfold和生物信息学软件分析SNHG5的二级分子结构以及与免疫细胞浸润的相关性;（5）通过核质分离明确SNHG5在前列腺癌细胞系的亚细胞定位。结果:（1）依据TCGA-PRAD和GSE70770数据筛选在前列腺癌差异表达的基因,包括203个lncRNAs、74个miRNAs和1492个mRNAs,借助在线数据库（starBase、miRcode、miRDB、TargetScan）预测的分子相关作用关系,构建 ceRNA调控网络;（2）通过Kaplan-Meier生存分析筛选出9个与生存预后相关的lncRNAs和11个miRNAs;（3）RT-qPCR分析结果表明SNHG5在前列腺癌组织和细胞中高表达;（4）在RNAfold获取SNHG5的二级分子结构,并依据ssGSEA方法分析发现SNHG5的表达与CD8 T细胞、浆细胞样树突状细胞、细胞毒性细胞的浸润水平呈正相关,与中央型T细胞、活性树突状细胞和嗜酸性粒细胞的浸润水平呈负相关;（5）核质分离结果表明SNHG5主要分布于前列腺癌细胞的胞质内。结论:根据TCGA-PRAD和GSE70770筛选并验证发现SNHG5在前列腺癌组织和细胞中高表达,主要定位于细胞质,且与不良预后以及免疫细胞浸润相关。第二部分 SNHG5对前列腺癌细胞生物学行为的影响目的:在体内和体外实验中,探讨SNHG5对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法:（1）在前列腺癌细胞系中分别转染质粒干扰siRNA和慢病毒sh-RNA、慢病毒oe-RNA,通过RT-qPCR检测它们的转染效率;（2）借助CCK8实验和平板克隆实验检测在分别下调和上调SNHG5表达后,前列腺癌细胞增殖活性和克隆形成能力的变化;（3）Transwell小室实验检测在分别下调和上调SNHG5表达后,前列腺癌细胞迁移和侵袭能力的变化;（4）裸鼠皮下荷瘤实验和免疫组化实验检测下调SNHG5对前列腺癌移植瘤体内生长和增殖活性的影响。结果:（1）在前列腺癌细胞系中分别转染质粒siRNA或慢病毒sh-RNA均可显著下调SNHG5表达,转染慢病毒oe-RNA可显著上调SNHG5表达;（2）CCK8实验和平板克隆实验结果表明,SNHG5可显著增强前列腺癌细胞增殖活性和克隆形成能力;（3）Transwell小室实验结果表明,SNHG5可显著提升前列腺癌细胞迁移和侵袭能力;（4）裸鼠皮下荷瘤实验和免疫组化实验结果表明,下调SNHG5可显著抑制前列腺癌移植瘤体内生长和增殖活性。结论:在体外生物学实验,SNHG5可显著促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的能力;在体内裸鼠皮下荷瘤实验和免疫组化实验中,SNHG5可显著促进前列腺癌细胞的生长和增殖活性。第三部分 SNHG5通过抑制miR-23a-3p表达促进前列腺癌恶性进展目的:探索SNHG5在前列腺癌中的潜在靶分子及其作用机制。方法:（1）结合在线数据库（starB ase、lncbase和lnCAR）和转录组测序数据预测SNHG5的靶分子;（2）RT-qPCR验证预测结果,在前列腺癌细胞系中检测miR-23a-3p的表达情况,并在上调或下调SNHG5后检测miR-23a-3p的表达改变;（3）RT-qPCR 验证细胞系中分别转染 miR-23a-3p inhibitor 和 miR-23a-3p mimic后miR-23a-3p表达变化;（4）通过数据库预测和双荧光素酶报告基因实验检测SNHG5与miR-23a-3p是否存在结合位点;（5）通过CCK8实验和平板克隆实验检测,抑制miR-23a-3p的表达能否减弱SNHG5对前列腺癌细胞增殖和克隆形成能力的促进作用;（6）通过Transwell小室实验检测,抑制miR-23a-3p的表达能否减缓SNHG5对前列腺癌细胞迁移和侵袭能力的促进作用。结果:（1）结合在线数据库（starB ase、lncbase和lnCAR）和转录组测序数据预测结果,miR-23a-3p可能是SNHG5的靶分子;（2）RT-qPCR结果表明,miR-23a-3p在前列腺癌细胞中表达下降,并且miR-23a-3p与SNHG5存在互相调控关系;（3）RT-qPCR结果表明,在细胞系中分别转染miR-23a-3p inhibitor和miR-23a-3p mimic后,miR-23a-3p表达相应的降低或升高;（4）结合数据库预测和双荧光素酶报告基因实验表明,SNHG5与miR-23a-3p存在直接结合位点;（5）CCK8实验和平板克隆实验表明,miR-23a-3p可减缓SNHG5对前列腺癌细胞增殖和克隆形成能力的促进作用;（6）Transwell小室实验结果表明,miR-23a-3p可减缓SNHG5对前列腺癌细胞迁移和侵袭能力的促进作用。结论:SNHG5与miR-23a-3p存在直接结合关系,并且SNHG5通过抑制miR-23a-3p表达,促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,从而参与肿瘤的恶性进展。第四部分 SNHG5通过miR-23a-3p/GPRC5B信号轴促进前列腺癌恶性进展目的:筛选miR-23a-3p的靶分子并进一步探讨SNHG5在前列腺癌中的作用机制。方法:（1）结合在线数据库和转录组测序数据预测miR-23a-3p的靶分子;（2）RT-qPCR验证GPRC5B在前列腺癌细胞系中表达情况,并分析在下调SNHG5或干扰miR-23a-3p后GPRC5B的表达改变;（3）借助CCK8实验和平板克隆实验检测在下调GPRC5B表达后,前列腺癌细胞增殖活性和克隆形成能力的变化;（4）通过数据库预测和双荧光素酶报告基因实验检测,miR-23a-3p与GPRC5B是否存在结合位点;（5）在前列腺癌细胞系中共同转染 sh-SNHG5与miR-23a-inhibitor,借助 RT-qPCR 和 Western blot 实验检测 GPRC5B 表达变化。结果:（1）结合在线数据库和转录组测序数据预测结果表明,GPRC5B可能是miR-23a-3p的靶分子;（2）RT-qPCR结果表明,GPRC5B在前列腺癌细胞系中高表达,并发现在下调SNHG5后GPRC5B的表达降低,在干扰miR-23a-3p后GPRC5B的表达升高;（3）CCK8实验和平板克隆实验结果表明,GPRC5B可增强前列腺癌细胞增殖活性和克隆形成能力;（4）数据库预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-23a-3p与GPRC5B存在直接结合位点;（5）RT-qPCR和Western blot结果表明,miR-23a-3p可减弱SNHG5对GPRC5B表达的促进作用。结论:GPRC5B与miR-23a-3p存在直接结合关系,并且SNHG5可通过抑制miR-23a-3p调控GPRC5B表达,促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,从而参与肿瘤的恶性进展。