小麦TaHMA2基因定点突变对其底物特异性影响的研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:C_Adrian
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TaHMA2,是小麦(Triticum aestivumL.)P1B-type ATPases的一种,在植物金属稳态中起重要作用。本实验室先前的研究表明在水稻(Oryza sativa L.),拟南芥(Arabidopsis thaliana L.),或者烟草(Nicotiana tabacum L.)中过表达TaHMA2后几种植物对重金属分别有不同的反应。本硕士学位论文在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中异源表达TaHMA2,研究其底物特异性。实验结果表明:TaHMA2的表达使酵母对Cd的敏感性增强,但是不包括Zn,Pb或者Co,与此同时,酵母细胞中Cd含量增加。eGFP-TaHMA2融合蛋白定位在酵母质膜上,呈现不均匀分布模式。N端重金属结合区域(N-MBD)的半胱氨酸和谷氨酸突变后,得到突变体TaHMA2C24A,TaHMA2C25A和TaHMA2E28A,这些TaHMA2突变体功能受损,这些结果显示保守区的半胱氨酸和谷氨酸在TaHMA2的重金属结合或转运中起重要作用。缺失大部分C端区域的突变体(TaHMA2△C,712-1003),TaHMA2△C的转运功能部分丧失,而N端区域缺失的突变体(TaHMA2△N,2-699),TaHMA2△N的转运功能完全丧失。TaHMA2△C和TaHMA2△N在酵母中均不能正确定位,TaHMA2△C可能是因为缺乏C端亚细胞定位信号而不能正确定位,而TaHMA2△N虽然含有亚细胞定位信号,但是可能因为缺乏N端跨膜区而不能插入到细胞膜而导致其在细胞质的不均匀分布。关于TaHMA2的底物特异性还需要在植物中做更深入的研究。
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