目的：　　临床病理资料和大量的动物实验已经证明，长时间大剂量给予甘露醇会导致肾近端小管上皮细胞出现广泛的空泡样变性，上皮细胞肿胀，肾皮质淤血等各种肾小管病理形态改变并诱发急性肾损伤。前期体外实验结果显示，较高剂量的甘露醇会损伤肾小管上皮细胞。在本研究中，我们将通过建立甘露醇体外损伤肾小管上皮细胞模型，进一步研究甘露醇的细胞毒性及其潜在的损伤机制。　　方法：　　通过MTT比色法检测甘露醇不同浓度（0、50、100、150、200、250、300、400 mmol/L）分别作用不同时间（4、10、24、48、72 h）对人肾小管上皮细胞（HK-2）活性的影响，同时在倒置显微镜下观察细胞形态的变化。用含有0、100、250 mmol/L的甘露醇作用于HK-2细胞24、48、72 h之后，收集细胞，超声破碎，分光光度法检测细胞匀浆液中脂质过氧化指标丙二醛(MDA）的含量和细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量。用含有0、100、250 mmol/L的甘露醇孵育HK-2细胞48 h后，收集各组细胞，AnnexinV-FITC双染法进行标记，用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。此外，用不同浓度的甘露醇处理 HK-2细胞不同时间后，将细胞固定，细胞核用 DAPI标记，细胞中的 F-actin蛋白用 FITC-phalloidin（鬼笔环肽）进行免疫荧光标记，在显微镜下观察细胞骨架的改变。　　结果：　　⑴MTT结果显示，细胞的活性随着甘露醇浓度（100~400 mmol/L）的增加和作用时间(24~72 h)的延长而逐渐下降，在250 mmol/L甘露醇孵育48 h时，细胞活力约为对照组细胞的一半。⑵倒置显微镜下观察细胞形态发现，对照组中，细胞呈铺路石状，伸展平铺在板底，且贴壁生长情况良好。而在250 mmol/L甘露醇作用48 h组，细胞明显出现肿胀变大，胞膜破裂，大部分贴壁细胞出现脱落，而且随着甘露醇浓度的增加和作用时间的延长，可以观察到贴壁细胞密度明显减少。⑶细胞中MDA和GSH的含量变化：在250 mmol/L甘露醇的作用下，HK-2细胞中MDA含量随着作用时间的延长而增多。250 mmol/L甘露醇分别孵育细胞24、48、72 h后，MDA含量增高，与各个时间点的对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。甘露醇降低细胞内 GSH含量，而且呈时间剂量依赖性。在250 mmol/L甘露醇作用48 h组，GSH含量降低到18.3±4.3?mol/g，显著低于对照组（52.2±1.6?mol/g）（P<0.05）。⑷流式细胞仪结果显示，250 mmol/L甘露醇作用细胞48 h组，细胞凋亡率增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。⑸通过对细胞骨架进行染色，显微镜下观察发现，对照组中细胞肌丝排列整齐，而250 mmol/L甘露醇作用48 h组，可明显观察到细胞骨架排列紊乱，大部分细胞出现肌丝断裂的情况。　　结论：　　大剂量甘露醇对肾小管上皮细胞有明显的毒性作用，其机制可能与氧化应激，细胞凋亡，以及细胞骨架破坏有关。