论文部分内容阅读
本论文包括两部分内容： 一、对木香(Aucklandia lappa Decne)中的多糖成分进行了研究，从中分离纯化得到的均一多糖，并对其进行抑制α-糖苷酶活性筛选研究； 二、对蒲公英(Herba Taraxaci)多糖成分进行了研究，并对蒲公英分离纯化得到的四个均一多糖进行抗氧化、抗补体、抗凝血活性筛选研究。 一、采用水提醇沉的方法得到木香和蒲公英粗多糖。再用阴离子交换纤维素DEAE和凝胶柱层析分离纯化粗多糖，木香粗多糖(APS)经DEAE-cellulose和Sephacrys-100分离纯化得到一个均一多糖APS-W1；蒲公英粗多糖(DPS)经DEAE-cellulose、Superdex S-200、Superdex S-75分离纯化得到DPS-2C-2，DPS-8B，DPS-1.0A和DPS-1.0B四个均一多糖，这四种多糖均是首次从蒲公英中分离得到。 二、通过各种化学方法，如高渗凝胶色谱法HPLC-GPC，糖组成，GC-MS，甲基化，IR，NMR等方式对均一多糖的结构进行鉴定，结果表明: 1，APS-W1为一分子量为3.9×103道尔顿的中性果聚糖，其主链是→2)-β-Fruc-(1→； 2，DPS-2C-2是一种鼠李半乳糖醛酸RG-1型果胶类多糖，分子量为1.3×104道尔顿，主链是由重复的[4)-a-GalpA-(1]m-[2)-α-Rhap-(1]-[4)-α-GalpA(1-]11-m组成； 3，DPS-8B具有58.5％半乳糖醛酸多糖，分子量为6.4×103道尔顿，糖组成为Rha：Ara：Man：Glc：Gal：GalA按照1:1.8:0.3:0.5:0.9:8.9摩尔比构成； 4，DPS-1.0A具有4.5％左右的糖醛酸，其分子量是1.0×105道尔顿，主要由Rha：Ara：Man：Glc：Gal按照1.7:4.5:1:2.7:5.2摩尔比例组成； 5，DPS-1.0B具有6％左右的糖醛酸，其分子量是8.3×103道尔顿，主要由Gal，Glc和Ara按照2:1.4:3.2的摩尔比组成，另外还含有少量的Rha，Man，Glc。 三、对从木香中分离纯化得到的均一多糖APS-W1进行抑制α-糖苷酶活性筛选研究，结果表明APS-W1对α-葡萄糖糖苷酶有一定的抑制率。对蒲公英分离纯化得到的均一多糖DPS-2C-2，DPS-8B，DPS-1.0A，DPS-1.0B进行抗氧化、抗补体、抗凝血活性筛选。抗氧化实验考察其DPPH清除自由基能力，结果表明： 1，DPS-2C-2没有表现出DPPH清除自由基活性； 2，在浓度为3mg/ml时，DPS-8B其清除自由基百分比约30.65±0.9％，DPS-1.0A为50.9±2.9％，DPS-1.0B为63.9±2.0％，较阳性对照抗坏血酸80.6±3.4％，三者都表现出一定的清除DPPH自由基能力。 抗补体活性中： 1，经典途径：DPS-8B其抑制一半红细胞溶血的浓度值CH50为0.087±0.007mg/ml；DPS-1.0A其CH50为0.023±0.0005mg/ml；DPS-1.0B其CH50为0.0126±0.0002mg/ml；三者较阳性肝素钠(CH500.0206±0.0007mg/ml)，均表现出一定的抗补体活性，其中DPS-1.0B经典途径抗补体作用比阳性对照肝素效果显著。 2，旁路途径：DPS-8B其AP50是0.177±0.023mg/ml，较肝素钠(AP500.149±0.021mg/ml)；DPS-1.0A其AP50是0.104±0.013mg/ml，DPS-1.0B其AP50是0.05885±0.023mg/ml，较肝素钠(AP500.0887±0.021mg/ml)。三者都表现出一定的抗补体活性，其中DPS-1.0B旁路途径抗补体效果比阳性对照肝素钠效果显著。 DPS-1.0B无论从经典途径还是旁路途径考察其抗补体活性，效果都比阳性对照显著，遂从经典途径考查其抗补体作用靶点，采用血清补体敲除方法学，最终确定DPS-1.0B作用于经典途径的补体成份C1q，C2，C3，C4，C5。 肝素是一种糖醛酸和氨基葡萄糖聚合而成硫酸化多糖，是一种较成熟的补体抑制剂，与补体激活系统中的13种成分都发生作用。但由于肝素的抗凝血作用，在生物体内需较高浓度才能发挥药效，限制了其临床应用。寻找没有抗凝作用的补体抑制剂，是抗补体活性研究的热点。近年来，部分学者相继发现从天然产物中提取的多糖是一种天然的抗补体成分，且多没有抗凝血作用。课题组采用凝血酶试剂盒的复钙时间(RT)和凝血酶时间(TT)来考察DPS-8B，DPS-1.0A和DPS-1.0B的抗凝作用，结果显示三者均没有延长RT和TT时间，初步显示都不具有抗凝血作用，证明其抗补体活性作用单一，可作为良好的抗补体抑制剂。 这些结果为今后进一步研究木香多糖和蒲公英多糖提供了强有力的科学数据，为将来基于蒲公英多糖而进行的抗氧化研究和抗补体药物研究奠定了良好的基础。