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目的:研究endocan(humanendocellular-specificmolecule-1,ESM-1)在正常人结直肠组织中的表达规律及其定位,分析endocan在结直肠正常粘膜与在结直肠癌中表达的差异;及其与临床参数之间的关系;从结肠癌细胞株RKO细胞中检测endocan的表达,研究丁酸对RKO细胞endocan表达的影响,以及对RKO细胞软琼脂克隆形成的影响。
方法:收集99例人结直肠标本,其中正常结直肠粘膜27例,结直肠癌72例(男性49例,女性23例;平均年龄在54岁,标准差为15.6;高中分化57例,低分化15例;有转移的27例,无转移45例;采用Dukes分期方法A+B期有43例,C+D期有29例;68例侵及全层,8例未及全层)。用原位杂交分析endocanmRNA表达,用免疫组织化学和Westernblot检测endocan蛋白质的表达;用SPSS统计软件分析endocan的表达情况以及其表达与临床参数的关系;培养结肠癌细胞,用细胞免疫化学和Westernblot的方法检测endocan在结肠癌细胞株RKO细胞中的表达,MTT的方法测丁酸对RKO细胞增殖的影响,以及软克隆的方法检测丁酸对RKO细胞软琼脂克隆形成的影响。
结果:Endocan在正常结直肠粘膜上皮细胞中有高度表达,且有明显的极性,呈胞浆核上分布。EndocanmRNA在正常的结直肠粘膜中的表达率为92.6%(25/27);在高中分化的肿瘤组织中也有较高表达,但无明显极性;在低分化的肿瘤组织中表达很低,且无极性,其在结直肠癌组织中的表达率为33.3%(24/72),与结直肠正常粘膜中的表达有明显的差异性(p=0.001)。Endocan蛋白在正常结直肠粘膜中的表达率为70.4%(19/27);在高中分化的肿瘤组织中也有较高表达,但无明显的极性;在低分化的肿瘤组织中表达很低,且无极性,其在结直肠癌组织中的表达率为36.1%(26/72),与结直1肠正常粘膜中的表达也有明显的差异性(p=0.005)。并且无论是mRNA水平还是蛋白水平,endocan的表达与其他的临床参数均无相关性,但与肿瘤的分化有明显的正相关。丁酸可以抑制RKO细胞的增殖,促进其分化;在RKO细胞中,endocan的表达很低,而经丁酸刺激后可发现其表达有明显的增加;且软琼脂克隆形成能力明显降低。
结论:Endocan在正常结直肠粘膜中高表达,呈核上极性分布;而它在结直肠癌组织中的表达与组织分化有关,分化越高的组织表达越强,Endocan的表达与其他的临床参数无关。丁酸刺激的RKO细胞中Endocan的表达增加且软琼脂克隆形成能力明显降低,提示endocan的表达与RKO细胞的分化程度有关。从而进一步证实endocan可能与肿瘤的发生发展以及组织分化有关。