目的：研究人β-防御素2促进树突状细胞成熟的作用及其对乙肝疫苗免疫BALB/c小鼠免疫功能的影响。方法：1.用重组小鼠IL-4(10ng/mL)、GM-CSF(20ng/mL)诱导小鼠骨髓细分化培养胞6天，通过倒置显微镜观察细胞集落形成，同时用流式细胞仪检测细胞表面分子（CD11c、MHCII、CD80、CD86）。2.用浓度分别为0ng/mL、12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的HBD2刺激培养BMDCs24h，通过qRT-PCR检测IL-6、IL-12p40mRNA表达，通过流式细胞仪检测MHCII、CD11C、CD80、CD86阳性细胞百分率。3.将小鼠随机分2组：分别在大腿内侧肌注射PBS200uL/只和HBD2300ng/只，并分别在注射后第4h、8h、12h眼眶采血和无菌条件下摘取脾脏。ELISA检测血清IL-12p70、IFN-γ含量，并采用qRT-PCR检测脾组织IL-6、IL-12p40、IFN-γ mRNA表达。4.将40只4-6周龄雌性BALB/c小鼠随机均分为4组，前3组分别于大腿内侧肌肉注射PBS200uL、乙肝疫苗3ug和HBD2300ng，第4组(联合免疫组)于同一部位注射300ng HBD2后4h后在同一部位再注射3ug乙肝疫苗。接种程序均为0、14、28天共3次。5. ELISA检测第一次免疫注射后第11天、22天、33天、42天小鼠血清HBsAbS/C.O值，并在第42天处死小鼠后收集血清检测IL-2OD值、IFN-γ和IL-12p70浓度和体外培养上清IFN-γ含量；通过称量小鼠体重和脾重，计算脾指数；用qRT-PCR检测脾细胞IL-2、IFN-γ和IL-12p40mRNA表达；以及流式检测脾细胞CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞百分率及比值。结果：1.倒置显微镜观察发现在重组小鼠IL-4和GM-CSF作用下，培养第1天可见大量圆形细胞密集生长；第2天可见大量点状细胞集落，第3天见呈簇状生长的细胞集落；第5天较多细胞呈半悬浮生长，并可见大量集落；第6天可见大量细胞从集落脱离，呈悬浮生长，细胞体积进一步增大，周边可见明显刺状突起，胞核易见。收集培养第6天的细胞，经流式细胞仪检测结果表明，细胞表面表达CD11c（92.2%），表达CD80（80.1%）、CD86（37.2%）和MHCI（I41.5%），表明提取出纯度较高但处于未成熟的DC。2.流式细胞仪检测不同浓度HBD2作用下的BMDCs发现，未加HBD2的BMDCs的CD11c+(84.82%)、MHCII+(60.67%)、CD80+(84.65%)和CD86+(55.85%)表达均相对较低，而加有不同浓度HBD2刺激的BMDCs中，以50ng/mL为最适刺激浓度，其BMDCs CD11c+(91.32%)、MHCII+（73.75%）、CD80+(92.65%)和CD86+(73.81%)细胞百分率最高，两组比较MHCII+、CD86+细胞百分率差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测发现IL-6基因相对表达水平在HBD2为100ng/mL时最高（3.16±0.1），与未加HBD2组比较差异有统计学意义(P<0.01)；而IL-12p40基因在50ng/mL HBD2时相对表达水平最高（2.99±0.18），与未加HBD2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。3.经300ng/只HBD2注射后，ELISA检测发现小鼠血清IFN-γ含量随时间延长而升高，4h、8h和12h分别为25.21±1.87pg/mL、35.40±1.77pg/mL和42.04±1.59pg/mL，12h与4h、8h比较差异有统计学意义(P<0.05)。但血清IL-12p70含量却随时间延长而降低，4h、8h和12h分别为42.72±0.91pg/mL、39.82±0.45pg/mL和32.08±1.68pg/mL。且4h与8h、12h比较差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测HBD2注射小鼠脾组织IL-6、IFN-γ和IL-12p40mRNA相对表达水平发现，其基因表达水平均随着时间延长而降低，其中IL-6RQ值分别为4h(6.43±0.27)、8h(4.18±0.1)、12h(2.03±0.23)；IL-12p40RQ值分别为4h(9.66±0.8)、8h(3.95±0.42)、12h(1.6±0.22)和IFN-γ RQ值分别为4h(13.37±0.53)、8h(6.7±0.67)、12h(4.4±0.34)。在HBD2注射后4小时各基因mRNA表达水平与其他时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PBS组所有指标在各时间点均无明显变化。4.统计学分析发现脾指数在各免疫组之间差异无统计学意义。ELISA检测发现乙肝疫苗组第11、22、33和42天HBsAb S/C.O值分别为1.14±0.07、11.18±0.69、16.98±0.74和27.08±4.59；联合免疫组对应值为3.93±0.33、16.67±1.23、21.28±0.43和33.41±1.68；两组HBsAb水平均随免疫次数的增加而明显升高，且不同时间点比较差异均有统计学意义（P<0.05），在同一时间点联合免疫组与乙肝疫苗免疫组相比较，差异亦有统计学意义(P<0.05)。PBS组和HBD2组各时间点不产生HBsAb。ELISA测定末次免疫2周后小鼠血清细胞因子发现，联合免疫组血清IL-2OD值(0.181±0.02)、IL-12p70(40.18±3.02pg/mL)和IFN-γ(33.56±1.61pg/mL)最高，且与其他组比较各指标差异有统计学意义（P<0.05）。乙肝疫苗免疫组血清IL-12p70(30.48±2.5pg/mL)和IFN-γ(22.16±1.36pg/mL)与PBS组(20.90±1.84pg/mL)和(14.34±1.28pg/mL)、HBD2组(35.72±3.23pg/mL)和(25.96±1.87pg/mL)比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。通过qRT-PCR检测发现联合免疫组脾细胞IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA相对表达水平最高，其RQ值分别达2.50±0.41、2.47±0.17和1.97±0.10，与PBS组和乙肝疫苗组相比较各指标差异均有统计学意义（P<0.05），与HBD2组相比较IFN-γ RQ值差异无统计学意义，IL-2、IL-12p40RQ值差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测发现联合免疫组CD4+T细胞百分率最高(32.9±1.88%)，与PBS(14.85±0.59%)组比较差异有统计学意义（P<0.05），但与乙肝疫苗组(27.36±1.59%)和HBD2组(31.52±2.58%)比较差异均无统计学意义（P>0.05）。CD8+T阳性百分率以HBD2免疫组(24.263±2.62%)最高，且与联合免疫(19.78±1.59%)、乙肝疫苗组（20.21±2.62%）和PBS组（17.98±3.2%）比较差异有统计学意义（P<0.05）；但联合免疫组CD4+/CD8+T比值(1.75±0.07)与其他组比较差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA检测体外培养上清HBsAg特异性IFN-γ含量，以PBS组(17.57±0.93pg/mL)为对照， HBD2组(21.92±2.97pg/mL)、乙肝疫苗组(30.24±4.03pg/mL)和联合免疫组(57.74±3.86pg/mL)含量都增高，其中以联合免疫组含量最高，与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：HBD2对小鼠BMDCs的成熟有一定的促进作用，与乙肝疫苗联合免疫能增强小鼠HBsAg特异性体液免疫和Th1型细胞免疫功能，对预防乙肝病毒感染及侵入细胞内的病毒清除具有重要作用，也为后续增强免疫功能机制研究打下初步基础。