TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)的通用名为重组人凋亡素2配体(Recombinant human Apo-2 ligand, Apo2-L),分子量约为19493道尔顿。与其他肿瘤坏死因子或化疗药物相比,TRAIL可快速启动细胞凋亡信号途径,强力、广谱诱导肿瘤和转化细胞凋亡,而对正常组织细胞基本无影响,具有良好的临床意义和应用前景。然而,很多肿瘤细胞对TRAIL并不敏感,这一现象严重限制了TRAIL的临床应用。近期的研究表明,某些化疗药物可显著增强TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用,具有协同抗肿瘤作用。因此,TRAIL与化疗药物合用已成为近年来的研究热点。目前,TRAIL与化疗药物合用已在临床上取得了初步进展,但其在治疗上仍存在以下缺陷：①TRAIL半衰期较短(人体的T1/2<0.6h),为维持其有效血药浓度,用药频繁且给药剂量大,而大剂量TRAIL具有发热,乏力,白细胞降低及中性粒细胞降低等毒副作用；②TRAIL和化疗药物组织分布广泛,对肿瘤细胞无专属的靶向治疗作用；⑧由于肿瘤细胞的多药耐药特性,TRAIL与化疗药物合用的疗效仍然有限,至今尚未取得令人瞩目的进展。利用纳米递药系统克服上述缺陷是治疗肿瘤的一种新思路。本研究拟利用长循环脂质体包载TRAIL和化疗药物(阿霉素和放线菌素D)制备复方脂质体。该递药系统既可以延长两种药物的体内滞留时间,又可利用EPR效应进入肿瘤部位,促使脂质体在肿瘤部位释放药物,提高复方用药的抗肿瘤效果。因此,本课题具有较好的研究价值和临床应用前景。本文第一章制备了复力TRAIL—阿霉素脂质体并对其体外抗肿瘤活性进行了评价。以pH梯度法制备了阿霉素脂质体,其粒径和包封率分别为98.4±19.2 nm和96.2±3.6%。因TRAIL为蛋白类药物,故在制备TRAIL脂质体前考察了超声、冻融和温度对其活性的影响。结果表明超声和温度(<50℃)对TRAIL的活性无显著影响,冻融对TRAIL的活性有严重的破坏作用。在此基础上,利用薄膜分散法制备了TRAIL脂质体,其粒径和包封率分别为115.6±25.4 nm和10.4±3.9%。体外细胞毒实验表明复方TRAIL—阿霉素脂质体对人肺癌细胞系A-549和胶质瘤细胞系U87具有更强的杀伤作用,对正常细胞BCEC(小鼠脑毛细血管内皮细胞)的抑制作用无显著增加,表明复方脂质体可能具有更好的安全性和更高的治疗指数。本文第二章以活体成像技术对复方TRAIL—阿霉素脂质体的肿瘤靶向特性进行了考察,结果表明包载近红外荧光探针Dir的脂质体对肺癌皮下瘤和原位脑胶质瘤均具有一定的肿瘤靶向特性。与Dir溶液相比,Dir脂质体不但增加了肿瘤部位的蓄积,而且降低了其在肝和脾的浓集,显示脂质体作为药物载体具有良好的应用优势。以阿霉素为研究对象,以荷A-549细胞皮下瘤裸小鼠为模型,考察了阿霉素脂质体的组织分布学特性。结果表明,与阿霉素溶液相比,阿霉素脂质体在心脏的分布显著降低,在肿瘤的浓度显著增加,表明阿霉素脂质体可以降低心肌毒性,增加抗肿瘤效果。重要的是,阿霉素脂质体与TRAIL脂质体复方后对其组织分布特性无显著性影响,表明复方脂质体进入体内后可能将两种药物同时输送至肿瘤部位释放,发挥协同抗肿瘤作用。本文第三章对复方TRAIL—阿霉素脂质体的体内抗肿瘤疗效进行了评价。以荷A-549细胞皮下瘤裸小鼠为模型,复方TRAIL—阿霉素脂质体能够显著抑制皮下瘤的生长,且1.5 mg/kg和3 mg/kg阿霉素脂质体与TRAIL脂质体复方的抑瘤率与5 mg/kg阿霉素脂质体相当。抗原位脑胶质瘤的药效学评价表明,复方脂质体组的中位生存期比生理盐水组延长了50%,而单用脂质体或溶液剂延长的中位生存期均低于25%。上述结果表明复方TRAIL—阿霉素脂质体在体内具有较强的协同增效作用,提示复方脂质体可有效提高抗肿瘤效果,降低化疗药物的毒副作用,具有良好的临床意义和应用前景。第四章以A-549和U87细胞为模型,考察了复方TRAIL—阿霉素脂质体协同增效的机理。研究显示复方脂质体对细胞内死亡受体、caspase家族和Bcl-2家族成员的表达均有显著影响。阿霉素脂质体通过增加细胞表面的死亡受体密度增强肿瘤细胞对TRAIL的敏感性。受体阻断实验亦证明死亡受体在细胞表面表达的增加,对复方脂质体的协同增效起着关键性作用。Western blot结果表明,复方脂质体增加了caspase-3,-8,-9的活化,显示TRAIL启动了线粒体依赖和线粒体非依赖两种途径促进肿瘤细胞的凋亡。另一方面,复方脂质体促使细胞内抑制凋亡的蛋白Mcl-1,Bcl-2和Bcl-xl减少,促进凋亡的蛋白Bak1/2增加。综合起来,复方TRAIL—阿霉素脂质体协同增效的机理是多方面共同作用的结果。为考察TRAIL脂质体与化疗药物脂质体复方抗肿瘤的普适性。本文第五章以临床应用范围较窄的放线菌素D为模型药物,制备了复方TRAIL—放线菌素D脂质体并对其进行了体内外药效学评价和机理的探索。研究结果表明该复方脂质体协同增效作用显著,显示TRAIL脂质体与化疗药物脂质体复方具有一定的普适性。