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支气管哮喘是由多种细胞(肥大细胞、T淋巴细胞,嗜酸性粒细胞)和细胞因子参与的气道慢性炎症。据西方学者统计研究发现哮喘的发病率正逐年提高[1],在青年人中的发病比例为5-6%,而在儿童中不仅发病率升高,而且容易发生致死性哮喘[2],。研究表明在哮喘的不同阶段有不同的细胞因子在发挥各自的特异性作用。Intelectin隶属于凝集素家族,可分为intelectin-1和intelectin-2。最早在小鼠小肠潘式细胞内发现的intelectin-1。随后在人体内发现intelectin(hIntL),人的intelectin蛋白是一种分泌型糖蛋白,包含295个氨基酸.和一个N端低聚糖,它的分子量是120KD,基本结构是三聚体[3].。hIntL mRNA在人的心脏,小肠,结肠等组织内均有表达,与鼠的intelectin相比两者具有高度同源性。我们在之前的研究中发现:在卵清蛋白致敏的小鼠哮喘模型中,Realtime-PCR法检测,小鼠肺组织内的intelectin mRNA转录水平增加,免疫组化证实小鼠气道内粘液蛋白比正常组增加。另有文献报道在结肠粘液腺癌患者中,IL-4、IL-13可引起hIntL-1表达上调[4]。Omentin(网膜素)是最近被证实的一种高度选择性分泌型蛋白,在内脏脂肪和皮下脂肪组织内表达[5]。Omentin又分为omentin-1,omentin-2,两者之间有83%的氨基酸相同,具有高度同源性[6]。Omentin在其它组织内也有低水平的表达,同时它又被认为是intelectin。对环境中的过敏原产生变态反应是常见的健康问题,目前哮喘的发病机制仍然不是很清楚。CD4+T淋巴细胞参与慢性过敏性疾病,Th1细胞主要分泌IFN-γ、TNF-α等,Th2细胞主要分泌IL-4,IL-5,IL-13等细胞因子调节过敏反应[7]。CC趋化因子和Th-2细胞因子在哮喘和其它免疫疾病中起着关键作用。在Th2细胞产生的细胞因子中IL-4和IL-13在哮喘的发病机制中起关键作用[8]。哮喘患者的肺组织和其它变态反应部位组织中这些细胞因子表达增加。因为IL-13可以加剧嗜酸性粒细胞的炎症和粘液分泌,所以它被认为是哮喘的关键因子之一[9]。T细胞的分化方向由固有免疫系统及其产生的细胞因子决定[10]。CD4+T淋巴细胞最终分化成Th1和Th2细胞,通过对IL-2, IL-4, IL-5,IL-13,GM-CSF,IFN-γ之间内在关系的研究发现:CD4+T的分化方向由这些因子转录水平的高低决定[11]。细胞因子通过有丝分裂严格控制T细胞的分化,通过研究这些基因在分裂中的表达,我们已经能够确定增值和分化的关系,IL-2的初期表达和细胞周期无关,而效应细胞因子的表达与细胞周期有关,IFN-γ的表达需要细胞不停地进行分裂,IL-4的表达需要三次细胞分裂,而且细胞周期和细胞因子信号必须一致行动[12]。气道上皮细胞暴露于抗原时,往往不能优先激活Th2细胞,曾有人报道过Th1介导抗原促进Th2细胞反应[13]。哮喘的发病机制说明T细胞因子参与其中,包括IL-4及其受体。选择性中和IL-13受体可减轻哮喘炎症的进展[14]。在寄生虫感染的IL-4突变(IL-4-/-)小鼠模型中,发现Th2细胞效应不能启动,Th2细胞因子IL-5、IL-9以及CD4+T细胞的细胞因子IL-10表达下降[15],推测Th2细胞分泌细胞因子需要IL-4的诱导。之前在小鼠哮喘模型中研究发现:小鼠的肺组织中intelectin-1,intelectin-2的mRNA表达水平增加,小鼠气道内的粘液蛋白分泌增加,小鼠的肺泡灌洗液中发现嗜酸性粒细胞数量及其比例增加。为了检测intelectin-1在哮喘患者急性发作期血浆中的表达水平,收集哮喘患者和正常健康志愿者血浆,观察intelectin-1在两组血浆中的蛋白水平,并检测IL-13的水平和肺功能,探讨intelectin和IL-13、肺功能之间的相关性。进一步探讨intelectin-1是否参与CD4+T淋巴细胞的分化。目的在于进一步了解intelectin-1在哮喘发病中的作用机理,并阐明哮喘的发病机制,为哮喘的治疗提供新思路,本实验拟分为两部分:第一部分Intelectin-1在哮喘患者急性发作期血浆中的表达水平目的:检测哮喘患者血浆中intelectin-1是否升高及其与肺功能的相关性方法: 1、收集外周血血浆为研究标本,将样本分为哮喘组(n=16)和正常组(n=19)。2、测定每例纳入对象的肺功能3.、ELISA法测定两组血浆中的intelectin-1水平。4、ELISA法测定两组血浆中的IL-13的水平结果: 1、与正常组相比较哮喘患者的FEV1/FVC%,FEV1/预计值均显著降低降低(p<0.05) 2、与正常组相比较哮喘患者血浆中intelectin-1含量显著升高(p<0.05). 3、与正常组相比较哮喘患者血浆中IL-13含量显著升高(p<0.01)。结论:哮喘患者血浆中intelectin-1水平升高,intelectin-1水平和肺功能之间没有相关性。哮喘患者的FEV1/FVC%,FEV1/预计值降低。第二部分Intelectin-1在CD4+T淋巴细胞分化中的作用目的:探讨intelectin-1在小鼠CD4+T淋巴细胞分化中的作用机制。方法: 1、制备条件培养基2、无菌分离小鼠脾脏,应用磁珠分选出T细胞,分为对照组和itln组3、提取RNA,用Real time-PCR法检测Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)和Th-1细胞因子(IFN-γ、TNF-α)的mRNA水平结果: 1、与对照组淋巴细胞相比,用含有intelectin-1蛋白的条件培养基孵育的CD4+T淋巴细胞内IL-5mRNA转率水平显著升高(n=3,p<0.05). 2、与对照组淋巴细胞相比,含有intelectin-1蛋白的条件培养基孵育的CD4+T细胞中IFN-γ,TNF-αmRNA含量没有显著下降(n=3,p >0.05)。结论: CD4+T淋巴细胞的分化和intelectin-1的表达有关,intelectin-1可能促进Th2细胞分化;它对Th1细胞的分化没有明显的影响。