【摘 要】
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探讨小鼠肺腺癌LA795细胞热休克蛋白70-抗原肽复合物的提纯方法;验证HAC70的抗肿瘤效果,为HAC70作为肿瘤疫苗进入临床进行实验探索.方法:①肿瘤HAC70的提纯:体外培养LA795细
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探讨小鼠肺腺癌LA795细胞热休克蛋白70-抗原肽复合物的提纯方法;验证HAC70的抗肿瘤效果,为HAC70作为肿瘤疫苗进入临床进行实验探索.方法:①肿瘤HAC70的提纯:体外培养LA795细胞,获得约16g湿重细胞,经低渗、反复冻融、机械振荡破碎细胞.用ADP-Agarose亲和层析、DEAE-52离子交换层析获得HAC70;②HAC70的定性、定量检验:采用SDS-PAGE电泳、Western blot进行定性及纯度检验,通过CBB法测蛋白浓度;③肿瘤模型的制备:于每只小鼠的右背部皮下注射2.5×10<6>/ml的LA795细胞的悬液0.2ml.④实验分组:该实验分为免疫组、早期治疗组、晚期治疗组,每组32只雌性T739近交系小鼠,每组再分为4个亚组,分别标示为A、B、C、D组;⑤给药时间、途径及剂量:免疫组在接种前14天、7天分别给予治疗;早期治疗组在接种肿瘤当天、接种后7天分别给予治疗;晚期治疗组在接种肿瘤后10天、17天给予治疗.其中,A组小鼠给予皮下注射PBS溶液0.2ml/只;B组小鼠给予皮下注射HAC70溶液0.2ml/只,即10μg/只;C组小鼠给予腹腔注射环磷酰胺溶液,剂量为60mg/kg;D组小鼠给予皮下注射HAC70溶液0.2ml/只,即10μg/只,腹腔注射环磷酰胺溶液,剂量为60mg/kg.⑥观察指标:观察各组治疗后有无毒副反应;各亚组在进行治疗两周后(免疫组在接种肿瘤细胞两周后),随机在各亚组中抽取4只小鼠处死,解剖称肿瘤重量,观察余小鼠的生存期;⑦所得数据经SAS6.0软件处理,成组设计单因素方差分析q检验.结论:通过ADP-agarose亲和层析、DEAE-52离子交换层析连续梯度洗脱可得到高纯度的HAC70,得率为80μg/g,经动物实验证明,所得HAC70有强大得抗肿瘤免疫源性,可以保护小鼠免受LA795细胞的攻击,对已存在的肿瘤,可以抑制肿瘤的生长,延长生存期.未观察到此疫苗有毒副反应发生.
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