干扰素（interferon，IFN）是一族具有抗病毒，影响细胞生长、分化和免疫调节功能等活性的蛋白质，也是第一个被发现、研究最多、第一个克隆化、首次用于临床疾病治疗的细胞因子。在兽医临床上，干扰素对疾病的预防、治疗以及疫苗佐剂的研究等方面发挥着重要作用。本试验根据Genbank公布的序列（poIFN-α：M 28623；poIFN-β：S 41178；poIFN-γ：X 53085），从其CDS区分别设计一对引物，应用反转录—聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR），从经conA诱导的长白猪脾脏细胞中分别扩增出三段序列（poIFN-α：570bp；poIFN-β：561bp；poIFN-γ：501bp）。然后利用T／A克隆将三段序列连接到pMD-T18载体中，转化大肠杆菌DH5α菌株，分别以菌液和质粒为模板PCR鉴定和酶切鉴定的阳性克隆，测序表明克隆到猪干扰素的三段序列。氨基酸序列分析表明，poIFN-α成熟蛋白在38、40、43、86、98、112、118位发生突变，结构分析表明所克隆的序列属于poIFN-α多基因家族的一类。poIFN-β成熟蛋白仅仅发生一个位点的突变，第22位由E变成G。poIFN-γ成熟蛋白仅在C端最后位发生突变，由K变成N。将克隆得到的猪干扰素基因分别亚克隆到表达载体pET-28（a）的EcoRⅠ和HindⅢ位点上以及pGEX-KG的BamHⅠ和HindⅢ位点上，经酶切鉴定和测序鉴定得到阳性克隆。经IPTG诱导在大肠杆菌BL21菌株中表达，提取包涵体蛋白和复性，SDS-PAGE检测表明，poIFN基因在大肠杆菌中实现了融合表达，获得具有一定生物学活性的蛋白。将pET-28（a）-IFN表达的蛋白与弗氏佐剂混合免疫新西兰大耳白兔，多次免疫后获得很高效价的兔抗猪干扰素多克隆抗体，效价分别为rabbit-anti-poIFN-α：10×2⁵；rabbit-anti-poIFN-β：10×2⁶；rabbit-anti-poIFN-γ：10×2⁵。饱和硫酸铵分级沉淀所得的兔IgG，经粗步纯化后再用A-50进一步纯化。pET-28（a）-IFN-α、β、γ表达的蛋白与弗氏佐剂混合，分别免疫Balb／c小鼠，取免疫小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞，使用PEG4000进行融合，用pGEX-KG-IFN表达的蛋白作为包被抗原，间接ELISA筛选分别得到阳性杂交瘤细胞克隆，以相应的空载体裂解菌作为平行阴性对照。本试验分别筛选得到分泌抗poIFN-α单克隆抗体的细胞株1株(2H₁₂)，分泌抗poIFN-β单克隆抗体的细胞株2株（1G₈、3A₁），分泌抗poIFN-γ单克隆抗体的细胞株2株（3D₅、4B₄）。染色体计数结果表明，所有杂交瘤细胞均为脾细胞与SP2／0细胞的杂交产物。Western blotting与间接ELISA表明，所有单克隆抗体均具有良好的特异性。经亚型鉴定试剂盒检测，各单克隆抗体的亚型分别为：2H₁₂：IgG₁；3A₁：IgG_2a；1G₈：IgG_2b；3D₅：IgG₁；4B₄：IgG_2a。上述5株单克隆抗体大量制备，其腹水的ELISA效价分别为：2H₁₂ 100×2⁶；3A₁ 100×2⁸；1G₈ 100×2⁷；3D₅ 100×2⁸；4B₄ 100×2⁶。