基因扩增是细胞中基因拷贝数大量增加的现象，在人类疾病中基因扩增与肿瘤和耐药现象密切相关。双微体作为肿瘤及获得性耐药细胞中基因扩增的重要载体之一主要含有癌基因和耐药相关基因，因此它的存在与肿瘤的发生、演进及预后密切相关。肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是造成化疗失败的主要原因，为进一步探讨耐药性的形成机制及双微体在肿瘤和耐药过程中所扮演的重要作用，本研究对氨甲喋呤抗性的小鼠胚胎成纤维细胞中MTX的耐药机制进行了初步探讨，并且在人卵巢癌细胞系UACC-1598模型中对双微体双向脉冲场凝胶电泳的分离方法进行了研究。　　 本实验中，首先应用半定量PCR技术、利用强大的网络数据库资源同时结合RT-PCR、Western Blot分析氨甲喋呤抗性的小鼠胚胎成纤维细胞中双微体上含氨甲喋呤靶基因的DHFR扩增子的组成并验证扩增子中基因表达情况。结果显示，DHFR扩增子大小约为361～363Kb由三个完整基因(DHFR、MSH3、DP58)和两个截短基因(Rasgrf和24930405M20Rik)组成，其中除DI-IFR基因外错配修复相关基因MSH3表达显著上调。同时，应用基因表达谱芯片对不同浓度药物抗性细胞全基因组的表达进行了快速全面的检测，通过相关软件分析具有明显表达差异的基因，并应用RT-PCR对其中表达上调最显著的十余个基因在DNA及RNA水平进行验证。结果表明，药物抗性细胞中药物代谢酶相关基因Cyplbl、Cyp2c55、Gstal、Gsta2、Gstzl表达明显上调；Vldlr、Tpd52、Ptx3、Slainl、Kritl、Fbxo2、Cxcll2和Slc35e3等8个基因不仅表达显著增高并且存在明显的扩增。所有结果提示药物抗性小鼠中除了靶基因的扩增参与氨甲喋呤耐药，DNA修复能力的改变、细胞解毒功能的增强等参与细胞耐药性的产生，此外作为基因扩增主要形式的双微体在耐药过程中同样发挥重要作用。　　 其次，以人卵巢癌细胞系UACC-1598为模型，应用脉冲场凝胶电泳技术对双微体的分离方法进行了探讨。实验中采用优化的双向脉冲场凝胶电泳技术对双微体进行分离，对分离所得的DNA应用琼脂糖酶切胶回收，并通过FISH，PCR等技术对其纯度进行验证分析。结果表明该方法可分离得到纯度较高的双微体特异性DNA，并且初步揭示UACC-1598细胞中双微体复杂的超螺旋结构，提示该方法的建立可有效的实现对双微体的分离。