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目的:证实醛缩酶B作为乙型肝炎病毒主S蛋白结合蛋白一种候选蛋白,探讨醛缩酶B生物学功能。方法:(1)以人HEPG2细胞RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出ALDOB基因。将PCR产物克隆进真核载体PCMV5内,构建含ALDOB基因的重组真核表达质粒。以实验室重组全S质粒为模板,利用PCR扩增主S蛋白基因,构建PCMV4-Flag-主S基因表达质粒,分别将重组质粒转染293FT细胞,用免疫荧光和Western blot等方法检测ALDOB及主S在293FT细胞中的表达。(2)将两种质粒共转293T细胞,激光共聚焦试验明确主S蛋白和醛缩酶B空间定位。将主S基因表达质粒稳转HepG2细胞,构建主S稳转株,通过免疫共沉淀方法,验证主S蛋白与醛缩酶B相互结合。(3)构建靶向醛缩酶B重组干扰质粒siALDOB-Pu6,导入HEPG2细胞中,筛选出干扰质粒的稳转株。通过细胞增殖实验、Transwell实验、细胞凋亡实验,探讨ALDOB在肝癌细胞HepG2生长、侵袭、凋亡等方面的作用。结果:(1)核酸序列分析的结果表明,克隆的ALDOB基因与主S基因在GenBank中分别与已登记基因序列100%同源。免疫荧光结果显示:ALDOB蛋白在细胞质表达;主S蛋白主要存在于细胞质中。Western blot结果显示:在约40KD位置有目的条带,与预期的重组ALDOB蛋白大小一致;在约26KD位置有预期的主S蛋白表达。(2)通过免疫共沉淀方法,成功确认醛缩酶B是乙型肝炎病毒主S蛋白结合蛋白一种候选蛋白。(3)特异性抑制ALDOB表达的HepG2细胞株较没有抑制ALDOB的HepG2细胞株,细胞增殖加快、侵袭能力增强、凋亡率增加。稳定干扰ALDOB的HepG2细胞稳转株较稳转空载Pu6的HepG2细胞株生长结论:(1)成功构建了含ALDOB基因以及主S基因的真核表达质粒。(2)醛缩酶B是乙型肝炎病毒主S蛋白的结合蛋白。(3)ALDOB能够抑制HepG2细胞增殖,使HepG2细胞侵袭能力下降,抑制HepG2细胞凋亡。