峨参石油醚提取物、峨参内酯联合氟尿嘧啶对HT29多细胞球模型的作用及机制研究

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目的:探讨峨参石油醚提取物、峨参内酯联合氟尿嘧啶对人结肠癌细胞HT29多细胞球模型的影响及其作用机制,为阐明峨参抗肿瘤作用机理提供依据,也为抗结肠癌肿瘤新药的开发提供基础研究数据。  方法:①采用MTT法检测峨参石油醚提取物(或峨参内酯)分别对HT29结肠癌平面细胞以及HT29结肠癌多细胞球模型的抑制作用,并探讨高、中、低剂量峨参石油醚提取物(或峨参内酯)联合氟尿嘧啶对HT29多细胞球模型的抑制作用;  ②采用流式细胞技术检测峨参石油醚提取物(或峨参内酯)联合氟尿嘧啶对结肠癌HT29多细胞球模型细胞周期以及细胞凋亡的影响;  ③采用wstern blot技术检测峨参石油醚提取物(或峨参内酯)联合氟尿嘧啶对结肠癌HT29多细胞球模型NF-κB P65以及MMP-9的表达。  结果:①峨参石油醚提取物对HT29二维细胞、三维多细胞球具有抑制作用,二维细胞IC50=11.907μg/ml,三维多细胞球77.330μ g/ml,且作用呈一定的剂量依赖性;  ②峨参石油醚提取物联合5-FU能够显著提高对HT29三维多细胞球的抑制作用,且随着峨参石油醚提取物浓度的增高,其抑制作用越显著;  ③5-FU可阻滞HT29细胞于S期,而峨参石油醚提取物则阻滞细胞于G2/M期,两种药物联合运用,可使得结肠癌细胞阻滞于G2/M期以及S期的比例增加;  ④峨参石油醚提取物、5-FU均能促进HT29细胞的凋亡,且两种药物联合使用其细胞凋亡率显著升高;  ⑤峨参石油醚提取物联合5-FU能够显著抑制HT29细胞NF-κB P65蛋白与MMP-9蛋白的表达;  ⑥峨参内酯对HT29二维细胞、三维多细胞球具有抑制作用,二维细胞IC50=6.33μg/ml,三维多细胞球35.699μg/ml,且作用呈一定的剂量依赖性;  ⑦峨参内酯联合5-FU能够显著提高对HT29三维多细胞球的抑制作用,且随着峨参内酯浓度的增高,其抑制作用越显著;  ⑧5-FU可阻滞HT29细胞于S期,而峨参内酯则阻滞细胞于S期、G2/M期,两种药物联合运用,可使得结肠癌细胞阻滞于G2/M期以及S期的比例增加;  ⑨峨参内酯、5-FU均能促进HT29细胞的凋亡,且两种药物联合使用其细胞凋亡率显著升高;  ⑩峨参内酯联合5-FU能够显著抑制HT29细胞NF-κB P65蛋白与MMP-9蛋白的表达。  结论:①峨参石油醚提取物与峨参内酯对HT29二维平面细胞以及三维多细胞球模型均具有着显著的抑制作用,且抑制作用呈一定的剂量依赖性;  ②峨参石油醚提取物(或峨参内酯)联合5-FU能够显著提高对结肠癌HT29三维多细胞球的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的增高而增加;  ③峨参石油醚提取物(或峨参内酯)联合5-FU对HT29细胞的抑制作用可能与阻滞细胞周期变化、诱导细胞凋亡以及抑制细胞NF-κB P65蛋白与MMP-9蛋白的表达有关。
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