本论文分两部分:车前子多糖的提取,车前子多糖对糖尿病小鼠自由基防御功能的影响。第一部分:采用微波提取和传统醇沉等工艺相结合的方法,提取得到的车前子多糖产率高、重复性和稳定性好。第二部分:通过观察车前子多糖对糖尿病小鼠模型的影响,探讨车前子多糖的抗氧化能力及可能机制。实验结果表明,车前子多糖具有一定的抗氧化及清除自由基的作用。　　 第一部分车前子多糖的提取　　 目的:建立提取车前子多糖的方法,为下一步进行车前子多糖的研究提供原料。　　 方法:精确称取已干燥的车前子5g,加入75ml蒸馏水,在微波强度为60％的微波炉中微波辐射提取65秒;取出后用绢布过滤,滤渣用热蒸馏水洗涤,合并滤液,离心(4000r·min-1,10分钟)分离;将上清液在旋蒸仪上进行旋蒸浓缩;上清液浓缩至1:20,在不断搅拌下缓缓加入2倍量无水乙醇,低温(4℃)静置12小时;将醇沉液离心(4000r·min1-,10分钟)分离,沉淀再用无水乙醇搅拌后浸泡1小时,离心后的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各搅拌洗涤两次,于60℃烘箱中烘干至恒重,即得精制车前子多糖。称重,计算产率,备用。　　 结果:采取该方法,提取得到的车前子多糖产率为6.47％;将干燥的多糖溶于水,测得换算因子f=1.998;其相对标准偏差分别为1.49和2.66;加样回收率为98.24％。　　 结论:实验结果表明,用微波提取和传统水提、醇沉、分离相结合的方法提取车前子多糖,具有工艺简单方便,产率高,重复性和稳定性好的优点,适合在实验室制备车前子多糖。　　 第二部分车前子多糖对糖尿病小鼠自由基防御功能的影响　　 目的:观察车前子多糖对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠氧自由基损伤的保护作用。　　 方法:　　 1实验分组　　 本实验采用昆明小鼠,随机分为5组(n=8):正常对照组(Control),糖尿病模型组(Model),不同剂量实验组,分别为(Model+P1);(Model+P2)和(Model+P3),糖尿病模型组为四氧嘧啶诱发的小鼠糖尿病模型。实验组分别在模型组中每天灌服不同剂量的车前子多糖,1组灌服PSP100mg·kg-1每天1次;2组灌服PSP200mg·kg-1每天1次:3组灌服PSP400mg·kg-1每天1次。所有小鼠置代谢笼中饲养20天。　　 2指标检测　　 为了评价车前子多糖(PSP)自由基防御作用。采用四氧嘧啶诱导剂,建立小鼠糖尿病模型。小鼠眼眶取血,以3500r·min-1离心10分钟,取血清测定有关指标。小鼠断头处死,迅速取心及肾组织,用生理盐水洗净,滤纸吸干,称重,以0.05mol/L磷酸缓冲液制成20％组织匀浆,-20℃保存备用。比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)活性,观察车前子多糖对各项生化指标的影响。　　 结果:　　 1小鼠糖尿病模型的确定　　 根据一次性腹腔注射四氧嘧啶(150 mg.kg-1),观察测定72小时后的空腹血糖水平,血糖值超过200 mg·dl-1的小鼠确定为糖尿病模型。　　 2对小鼠血清、心脏MDA含量的影响　　 血清、心脏Model组MDA含量分别为:血清(10.29±1.12)nmol·mg-1·ml-1,心脏(2.96±0.27)nmol·mg-1·pro-1。不同浓度的PSP(100～400mg·kg-1)分别与Model组对比,MDA的含量明显减少,其中血清(Model+P1)组为(9.01±0.91)nmol·mg-1·ml-1,与相对应Model组相比有差异(P＜0.05);(Model+P2)组为(8.93±0.72)nmol·mg-1·ml-1,(Model+P3)组为(8.30±0.94)nmol·mg-1·pro-1,与相对应Model组相比有差异(P＜0.01)。心脏各组分别为(1.43±0.41)nmol·mg-1·pro-1,(1.26±0.11)nmol·mg-1·pro-1,(1.23±0.17)nmol·mg-1·pro-1,与相对应Model组相比有差异(P＜0.01)。两者皆存在剂量依赖性(P＜0.05),表明PSP具有自由基防御功能。　　 3对小鼠血清、心脏SOD活力的影响　　 血清、心脏Model组SOD活力分别为:血清(237.21±13.83)U·ml-1,心脏(73.88±10.25)U·mg-1·pro-1。不同浓度的PSP(100～400mg·kg-1)分别与Model组对比,SOD的活力增强,其中血清(Model+P1)组为(246.57±10.81)U·ml-1,心脏(Model+P1)组为(80.25±8.88)U·mg-1·pro-1,相对各自Model组SOD活力都略有增强,但均无统计学意义。血清(Model+P2)组为(258.80±11.19)U·ml-1,(Model+P3)组为(277.92±8.70)U·ml-1,与相对应Model组对比有显著差异(P＜0.01);心脏(Model+P2)组为(91.88±15.92)U·mg-1·pro-1,与Model组相比有差异(P＜0.05);(Model+P3)组为(111.90±10.79)U·mg-1·pro-1,与Model组相比有显著差异(P＜0.01)。可以发现SOD活力与PSP之间存在剂量依赖性(P＜0.05),表明PSP具有自由基防御作用。　　 4对小鼠血清、心脏SOD/MDA比值的影响　　 与Control组比较,Model组脂质过氧化代谢产物MDA含量增加,而SOD/MDA比值下降,SOD/MDA是反映机体自由基代谢的一个重要指标,其比值下降表明机体清除自由基能力降低和脂质过氧化反应增强。不同浓度的PSP(100～400mg·kg-1)对SOD活性具有激活作用,使SOD/MDA明显增强(P＜0.01)。结果表明PSP对四氧嘧啶激发的糖尿病造成的SOD的降低可以纠正。　　 结论:车前子多糖能够降低四氧嘧啶诱发的小鼠糖尿病模型的MDA含量,提高NO的含量,增强抗氧化物酶类SOD、CAT和GSH-Px、NOS的活性。提示车前子多糖具有提高抗氧化功能及清除自由基的作用。