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目的：在前期研究基础上,进一步探讨let-7b和miR-199a对黑色素瘤增殖生长的影响。方法：首先构建靶向let-7b和miR-199a的过表达质粒及inhibitor干扰单链,运用基因转染技术将其导入黑色素瘤高转移细胞B16F10中,使let-7b基因和miR-199a基因过表达或表达抑制,以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)验证对应基因的差异表达,应用蛋白免疫印迹方法(Western Blot)检测相关蛋白(cyclinD1、Met)的差异表达,再以MTT绘制细胞生长曲线,并用流式细胞术检测细胞凋亡率,最后统计分析let-7b和miR-199a对B16F10细胞增殖生长的影响。结果：1.质粒及inhibitor转染后,各组转染细胞均可见荧光细胞,提示转染成功。2. Real-time PCR检测发现,let-7b质粒组中let-7b基因相对表达量(3.8776±0.1372)明显高于空白组和空质粒组(1.1400±0.2769)(P<0.05),let-7b inhibitor组中let-7b基因相对表达量(0.2057±0.0263)明显低于空白组和inhibitor对照组(0.9760±0.2300)(P<0.05)；miR-199a质粒组中miR-199a基因相对表达量(2.8660±0.2821)明显高于空白组和空质粒组(0.9809±0.1703) (P<0.05), miR-199a inhibitor组中miR-199a基因相对表达量(0.2656±0.0253)明显低于空白组和inhibitor对照组(0.7512±0.0690)(P<0.05)；而空质粒组,inhibitor对照组和空白组比较无显著差异性(P>0.05)。3. Western-blot检测发现,let-7b质粒组中cyclinDl蛋白相对含量(2.023±0.315)与let-7b inhibitor组中cyclinD1蛋白相对含量(1.857±0.377)均明显高于空白组(0.997±0.041)(P<0.05)；而miR-199a质粒组中cyclinD1蛋白相对含量(1.763±0.172),空质粒组(1.490±0.292), miR-199a inhibitor组(1.590±0.286)及inhibitor对照组(1.443±0.099)和空白组比较无显著差异性(P>0.05)；miR-199a质粒组中Met蛋白相对含量(5.19±0.309)与miR-199a inhibitor组中Met蛋白相对含量(4.87±0.044)均明显高于空白组(2.2±0.198)(P<0.05)；而let-7b质粒组中Met蛋白相对含量(3.24±0.340),空质粒组(2.85±0.047),let-7b inhibitor组(2.49±0.068)及inhibitor对照组(2.73±0.033)和空白组比较均无显著差异性(P>0.05)。4.MTT绘制细胞生长曲线发现,与空白组相比,let-7b质粒组及miR-199a质粒组生长呈下降趋势,且到转染后第三天,此趋势最明显,具有统计学意义(P<0.05)；而空质粒组及let-7b inhibitor组,miR-199a inhibitor和inhibitor对照组细胞生长趋势与空白组比较无显著差异性(P>0.05)。5.流式细胞术检测细胞凋亡率发现,let-7b质粒组细胞凋亡率(11.8±1.19)%与miR-199a质粒组细胞凋亡率(11.3±1.59)%均明显高于空白组(5.77±1.74)%(P<0.05)；而空质粒组细胞凋亡率(6.75±1.59)%, let-7b inhibitor组(4.39±1.52)%,miR-199a inhibitor组(4.97±1.47)%及inhibitor对照组(6.68±1.71)%与空白组比较无显著差异性(P>0.05)。结论：let-7b和miR-199a负调控B16F10细胞的增殖生长。