纳米胶体金层析法快速检测农药克百威残留

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本试验以人工合成的克百威免疫原免疫BALB/C F1小鼠,分析纳米胶体金层析快速检测克百威残留量。 首先用化学交联的方式合成了两种人工抗原BFNH-BSA、BFNH-OVA,化学交联产物用紫外扫描和蛋白电泳进行分析鉴定。 用合成的人工免疫原BFNH-BSA免疫BALB/C F1小鼠,在第四次免疫后第八天取血制备抗血清,用BFNH-OVA包被酶标板,间接ELISA检测结果表明:氨基甲酸酯类杀虫剂的交叉竞争抑制试验作用明显。 用50%PEG将小鼠的脾细胞与SP2/0瘤细胞进行融合,以12块96孔酶标板接种融合细胞,减少了克隆次数,缩短了试验进程。用有限稀释克隆技术,以间接ELISA法和间接竞争ELISA法,经过2-4次的克隆和筛选,最终共筛选得到5株能稳定分泌目的抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水,腹水效价达10-6-10-7。 试验中首次尝试了使用纳米金颗粒替代酶标记农药抗体,用40纳米的胶体金成功标记了抗克百威的单克隆抗体,初步建立了胶体金定量免疫实验,在此基础上研制了金标免疫层析快速检测试纸条, 将此标记抗体、OVA-BFNH抗原、羊抗鼠IgG分别固化在NC膜上,根据竞争抑制免疫层析原理,进行克百威农药的半定量分析测定。
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