药物分子进入细胞是药物投递系统中非常重要的一个环节。哺乳动物细胞有膜的存在,使蛋白质、核酸类等许多具有生物活性的大分子药物无法直接进入细胞,导致此类药物在实际使用中出现许多局限,难以起到治疗效果。细胞穿膜肽能携带多种活性目的分子高效进入细胞。近20年来,多种细胞穿膜肽被陆续证实并报道。对细胞穿膜肽结构及生物化学性质的研究,发现细胞穿膜肽具有以下共同特性:(1)都包含一段长短不一的正电荷多肽,富含精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸;(2)穿膜肽二级结构中都存在α-螺旋空间结构。其中,富含精氨酸的穿膜多肽被深入研究,发现一段单独的多聚精氨酸就能够顺利实现跨膜,其穿膜效应不具有细胞选择性,使之成为目前应用最广泛的一类穿膜肽。为实现外源蛋白有效穿膜的过程,本文探讨了细胞穿膜肽Arg9介导的绿色荧光蛋白蛋白的穿膜作用。通过构建p ET-15b-Arg9-EGFP原核表达载体,利用适宜浓度的IPTG诱导DE3大肠杆菌原核表达体系以及His标签纯化系统,纯化获得Arg9-EGFP蛋白;运用乳腺癌MCF-7细胞模型,检测Arg9穿膜肽的穿膜效果。实验结果表明,我们成功制备了Arg9-EGFP融合蛋白。与不含Arg9穿膜肽的EGFP蛋白相比,Arg9-EGFP融合蛋白可有效穿膜进入细胞内部,并显示剂量依赖性。荧光检测结果表明,进入细胞的Arg9-EGFP蛋白主要聚集在细胞浆内。本研究表明Arg9细胞穿膜肽可以有效介导目标蛋白进入细胞,并保持目标蛋白的大分子活性,有望成为实现特定蛋白穿膜并发挥药物作用的潜在工具,为蛋白类新型药物的投递方式带来新思路。