目的 　　本项目用不同证型食管癌患者血清、手术切除癌组织标本以及正常血清为研究对象,运用病人自身血清筛选自身抗原,从中医各证型食管癌患者癌组织中鉴定、分析和比较出食管癌癌变阶段自身抗原,为食管癌中医证候分子病机的阐明及诊断和治疗提供可靠依据。 　　方法 　　按照中医辨证标准收集痰气交阻型、瘀血内结型、津亏热结型和气虚阳微型四种中医证型食管癌患者组织样品,运用一维电泳分离患者癌组织蛋白,用患者血清和正常血清为一抗进行Western blot反应,找出特异条带,再运用二维凝胶电泳分离患者癌组织蛋白,制备三套凝胶,两套分别用患者血清和正常血清为一抗进行免疫印迹反应,二者免疫印迹点比对,找出患者组特异显色点,一套用硝酸银染色,挖取染色凝胶上特异显色点对应的蛋白点,将挖取的蛋白样品用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,所得结果在 NCBI数据库(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)中搜索,获得蛋白的名称及功能,对其进行相关性分析。 　　结果 　　1.进一步改进SERPA技术,四个证型共获得一维电泳患者血清为一抗免疫印迹图像4张、二维电泳分别用患者和正常血清为一抗免疫印迹图像 8张、胶用硝酸银染色图像8张,为特异蛋白的鉴定奠定基础。 　　2.每个证型4幅图片进行对比,共获得8个特异蛋白点,其中痰气交阻证 1个,编号为1号；瘀血内结证3个,编号为2号、2上、2下；津亏热结证3个,编号为3号、3左、3右；气虚阳微证1个,编号为4号。 　　3.经质谱分析得到7种特异表达蛋白质,1号为keratin, type I cytoskeletal 13；2号为caldesmon；2上为tumor rejection antigen (gp96) 1 variant、2下为heat shock protein gp96 precursor；3号为 actin, gamma 2, smooth muscle, enteric, isoform CRA_a；3左、3右均为Keratin 13；4号为Keratin, type I cytoskeletal 16,所有蛋白质鉴定得分均大于 63分,有统计学意义。 　　结论 　　1.改进了SERPA技术。 　　2.本课题得到7种蛋白质,其中 caldesmon； tumor rejection antigen (gp96) 1 variant ；heat shock protein gp96 precursor；actin, gamma 2, smooth muscle, en teric, isoform CRA_a；Keratin, type I cytoskeletal 16等5种蛋白质在国内外还未有做为食管癌自身抗原的报道,其可能是新发现的食管癌自身抗原。本课题的探索对食管癌的发生、发展的潜在分子生物学机制提供理论支持,对食管癌早期诊断及预后判断等指标提供可能性。