【摘 要】
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目的 研究从解脲脲原体(Uu)提取的脂质相关膜蛋白(LAMPs)在体外诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS)及产生一氧化氮(NO)的水平,研究该膜蛋白能否激活小鼠巨噬细胞
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目的 研究从解脲脲原体(Uu)提取的脂质相关膜蛋白(LAMPs)在体外诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS)及产生一氧化氮(NO)的水平,研究该膜蛋白能否激活小鼠巨噬细胞中核因子kappa B(NF-κB)及诱导细胞发生凋亡的情况,以便了解Uu潜在的致病性,为进一步探讨Uu LAMPs诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS及诱导巨噬细胞发生凋亡的分子机制提供实验依据。 方法 用从Uu提取的LAMPs刺激小鼠巨噬细胞,用Griess试剂测定经刺激后的小鼠巨噬细胞产生的NO水平,以RT-PCR和Western blot方法分析iNOS的表达水平,用细胞免疫组化、间接免疫荧光检测NF-κB的激活,用Western blot检测核提取物中NF-κB蛋白的表达,且利用RT-PCR和Western blot方法检测NF-κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX)对iNOS的表达及对NF-κB激活的影响。用细胞凋亡检测试剂盒检测经Uu LAMPs处理的小鼠巨噬细胞的凋亡情况。 结果 Uu LAMPs能诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS,且能以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO,当LAMPs的浓度为3μg/mL时产生的NO量最多,为13.56±0.5μmol/L;但当LAMPs从3μg/mL增加到5μg/mL时,NO产生的量反而减少。另外当LAMPs刺激细胞4h后即可从培养基中检测到NO,而刺激32h后产生的NO量则达到高峰。在用该膜蛋白与NF-κB的抑制剂PDTC或蛋白酶抑制剂
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