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目的:观察电针和骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植联合应用对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)病灶及周围微环境的影响,探讨神经元修复的机制。 方法:1.将复苏的BMSCs培养贴壁达80％时,将培养液更换为预诱导液培养24小时后,再更换为无血清诱导液诱导6h。收集细胞备用。2.采用胶原酶及肝素注入尾状核制备大鼠ICH模型。3.术后分别在2h、24h、48h时间点对SD大鼠进行神经功能评分(Neurological Severity Score,NSS)评分,评分大于9分者则纳入实验。并随机分为:对照组(control组)、细胞移植组(BMSCs组)、电针与细胞移植联合组(electro-acupuncture combined with BMSCs transplantation, Ea BMSCs组)。4.在术后第3天时通过脑立体定位仪导航,将20ml0.9％生理盐(Normal saline,NS)水和BMSCs悬液移植入ICH病灶中。根据移植后喂养天数每组再分为:1d、3d、5d、7d、14d五个亚组。移植2h后,对EaBMSCs组取大椎穴和百会穴,进行电针治疗,每天一次,直至处死。5.对各组SD大鼠每天行NSS评分一次,直至处死取材。6.通过蛋白免疫印迹(Wetern Blotting,WB)方法检测各组不同时间点神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子( brain derived neurophic factor, BDNF)、β-微管蛋白(tubulin)Ⅲ及甘油醛-3-磷酸脱氢酶( glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)蛋白表达变化情况。 结果:1.制备大鼠ICH模型成功后,移植细胞前对control组、BMSCs组、Ea BMSCs组进行NSS评分,各组之间评分无显著性差异;移植后第5天时,移植后第5天,BMSCs组评分显著低于control组(P<0.05);Ea BMSCs组(除1d外)明显低于control组,(P<0.05)。Ea BMSCs组和control组相比较(除1d外)均有显著差异,有统计学意义(P<0.05)。改善神经功能缺失症状更明显。2.Ea BMSCs组和BMSCs组的NGF蛋白表达明显增加;于移植后7天、14天,BMSCs组较control组增加显著,有统计学意义(P<0.05);Ea BMSCs组与BMSCs组和control组比较(除1d外)增加更明显,差异有统计学(P<0.05)。Ea BMSCs组大鼠ICH病灶周围 NGF蛋白表达上调更明显。3.Ea BMSCs组和BMSCs组BDNF蛋白表达明显增加,移植后5天、7天、14天时,较control组差异显著有统计学意义(P<0.05);在移植后第3天、5天、14天, Ea BMSCs组较BMSCs组表达增加显著,有统计学意义(P<0.05)。Ea BMSCs组较单纯BMSCs组和control组大鼠ICH病灶周围BDNF蛋白表达上调更明显。4.在同一时间点,Ea BMSCs组和BMSCs组与control组比较β-tubulinⅢ蛋白表达明显增加;在移植后5天、7天、14天, BMSCs组较control组增加显著,有统计学意义(P<0.05);Ea BMSCs组(除移植1天)均较BMSCs组明显增加,有统计学意义P<0.05)。电针和BMSCs移植联合应用较单纯BMSCs移植,更利于神经元的修复。 结论:1.外源性BMSCs移植可使大鼠ICH病灶周围NGF和BDNF蛋白表达增加,保护神经元。NGF和BDNF蛋白表达持续时间有一定重复性。2.电针和BMSCs移植联合应用,较单纯移植BMSCs更能改善ICH大鼠神经缺失症状,促进其运动和感觉功能恢复。3.电针和BMSCs移植联合应用,改善出血灶及周围的微环境,上调NGF和BDNF蛋白表达,更利于内外源性神经元的存活。4.大鼠ICH后脑损伤神经功能恢复能力较强。