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肥胖牛易发生胰岛素抵抗，使得胰岛素的敏感性下降，影响胰岛素对体内糖、脂肪的代谢的调节。脂肪代谢紊乱疾病和脂肪细胞分泌的各种因子有很大的关联，而脂肪细胞的体外培养是研究脂肪细胞因子的一种理想的体外模型。 抵抗素被认为是联系胰岛素抵抗和肥胖的一个纽带，研究认为抵抗素可以引起肝脏的胰岛素抵抗，并且在奶牛泌乳期间，脂肪组织抵抗素表达升高。本实验利用体外培养犊牛前脂肪细胞的原代及传代培养技术和半定量RT-PCR方法研究脂肪细胞因子抵抗素在脂肪细胞分化过程中的表达情况，及不同浓度胰岛素、葡萄糖、非酯化脂肪酸对抵抗素mRNA丰度的影响。为了解奶牛胰岛素抵抗、肥胖和抵抗素之间的关系奠定理论和实验基础。 首先，对原代培养的脂肪细胞进行传代培养。在传代培养过程中，绘制细胞生长曲线，脂肪细胞油红0含量变化曲线并根据油红染色情况判断脂肪细胞的分化程度，用RT-PCR的方法检测细胞分化标志物脂蛋白酯酶(LPL)、3-磷酸甘油酯脱氢酶、(GPDH)瘦素(LP)。用胎盘蓝染色计算细胞冻存后的存活率。细胞传代培养后，保持脂肪细胞的蓄积脂肪的特性，细胞生长曲线与原代脂肪细胞的生长曲线保持一致，并能够检测到细胞分化标志产物脂蛋白酯酶(LPL)、3-磷酸甘油酯脱氢酶(GPDH)、瘦素(LP)。细胞冻存复苏后保持87％的存活率。表明可以利用传代后的脂肪细胞进行细胞因子的研究，并为奶牛脂肪细胞株的建立提供理论依据。但利用检测mRNA表达的方法不能判断牛脂肪细胞分化的情况，这与以往报道的人和鼠脂肪细胞不一致。 然后从犊牛的网膜组织提取总RNA，通过一对引物，成功的克隆了奶牛的抵抗素151bp cDNA序列，经测序分析，同源性达到98％。在此基础上，在原代培养脂肪细胞的4d，6d，8d，10d，12d，14d，16d分别提取细胞总RNA，以β-actin作为内参照，定量分析脂肪细胞分化过程中抵抗素mRNA丰度变化。结果表明，脂肪细胞分化过程中，抵抗素mRNA是先降低后升高，在4d-12d抵抗素mRNA呈下降趋势，12d达到最低值，之后又开始回升。据此证明，抵抗素mRNA在前脂肪细胞和成熟脂肪细胞都有表达，在细胞分化过程减低，而在成熟脂肪细胞有随着脂肪形成的增加而增加