【摘 要】
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一、设计和筛选单链阻遏蛋白的高亲和力DNA结合序列.单链阻遏蛋白RR噬菌体434阻遏蛋白的衍生物,它是噬菌体434阻遏蛋白的N端DBD()1-69位氨基酸组成的共价二聚体.这个单链分子
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一、设计和筛选单链阻遏蛋白的高亲和力DNA结合序列.单链阻遏蛋白RR<,TRES>噬菌体434阻遏蛋白的衍生物,它是噬菌体434阻遏蛋白的N端DBD()1-69位氨基酸组成的共价二聚体.这个单链分子有两个DBD,一个是野生型噬菌体434的DBR-R,另一个是突变了的DBD-R<,TRES>,二者用重组接头以头接尾的方式连接起来,在R<,TRES>α3-螺旋中-1、1、2、5位氨基酸与DNA识别紧密相关,它们分别为CATACAAGAAAGNNNNNNTTTATG随机DNA库,通过RR<,TRES>与随机DNA库的体外结合和循环筛选.二、非同位素的方法筛选单链阻遏蛋白的最佳DNA结合序列初探.克隆和表达了带半胱氨酸尾的单链阻遏蛋白,利用已包被了马来酰胺的活性板可以与自由巯基结合的特性,将蛋白固定在活性板表面.体外筛选R<,TRES>R<,TRES>的最佳DNA结合序列,得到了一些与R<,TRES>R<,TRES>结合的序列,但Kd值nM数量级.此方法需进一步优化.
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