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猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是目前已知最小的动物病毒。根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列,将其分为PCV-1和PCV-2两型。PCV-1广泛存在于猪体内及猪源传代细胞系中,经动物感染试验证明PCV-1无致病性,但与猪的健康密切相关,因此对该病原的研究十分必要。PCV-2与猪群中发生的多种疾病相关,如断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征及先天性震颤等,给全世界养猪业带来了巨大的经济损失。本试验通过设计合成特异性引物,扩增PCV-1 ORF2基因并进行原核表达,用所获得的Cap重组蛋白经纯化后作为包被抗原建立了一种敏感、特异、稳定性好的间接ELISA方法。根据GenBank公布的PCV-1 ORF2基因序列,设计并合成三对特异性引物,以PCV-1为模板经PCR扩增出三个ORF2基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中。经过测序,将三段ORF2基因定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上,然后转入表达宿主菌BL21中,获得了目的蛋白,分子量分别约为41Ku、40Ku、38Ku。通过Western blot证明这三种重组蛋白均具有抗原性。选用抗原性最好的且不与PCV-2标准阳性血清发生交叉反应的CapB重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件建立了能检测血清中PCV-1抗体的间接ELISA。此外,用CapB蛋白和实验室已制备的PCV-2的Cap蛋白同时作为包被抗原,建立了一种能鉴别PCV-1和PCV-2的间接ELISA。用以上两种方法分别检测PRRSV、CSFV、PRV等病毒的标准阳性血清进行特异性试验,结果表明特异性良好;两种ELISA与免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)同时对92份血清样品进行检测,符合率分别为93.5%、96.7%;重复试验结果表明,变异系数都小于10%。应用以上两种方法对国内部分地区采集的227血清样品进行检测,结果有75份为PCV-1阳性,阳性率为33.04%。69份为PCV-2阳性,阳性率为30.4%,其中有7份为混合感染。