养殖双齿围沙蚕营养成分分析及其纤溶酶的分离纯化

来源 :青岛科技大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:jhzdw1982
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双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)是我国最为常见的沙蚕之一,近几年,随着沙蚕养殖规模的不断壮大,养殖沙蚕资源在沙蚕市场所占的比重逐渐增加,沙蚕资源应用的单一性逐渐显现,其氨基酸和脂肪酸含量高等特点不能得到充分开发,沙蚕资源,尤其是养殖沙蚕在新领域的开发和利用越来越受到重视。本论文对养殖双齿围沙蚕(cultured P.aibuhitensis)和野生双齿围沙蚕(wild P.aibuhitensis)营养成分和安全性进行对比分析,并从养殖双齿围沙蚕分离出一种具有纤溶活性的蛋白酶。另外还对纯化后的纤溶酶的部分酶学特征和结构特性进行了探究,得到如下研究结果:1.以养殖双齿围沙蚕和野生双齿围沙蚕基本营养成分(粗蛋白、脂肪、灰分及水分),氨基酸和脂肪酸的种类和含量为评价指标,发现养殖沙蚕的脂肪含量显著高于野生沙蚕中含量(P<0.05),粗蛋白、水分、灰分含量无显著性差异;两种沙蚕中的对虾必需氨基酸/总氨基酸(EAA/TAA)均在40%左右,对虾必需氨基酸/非必需氨基酸(EAA/NEAA)均在60%以上,符合FAO/WHO关于高品质蛋白的标准,依据两组沙蚕的氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS),养殖沙蚕的第一限制氨基酸含量高于野生沙蚕含量;养殖沙蚕的不饱和脂肪酸(UFA)和高度不饱和脂肪酸的(HUFA)含量分别为(66.15±3.77)%和(54.11±2.58)%,均显著高于野生沙蚕的含量((56.13±6.60)%、(43.28±5.50)%)(P<0.05)。2.以沙蚕常见重金属(Cr、Cu、Cd、Pb、As和Hg)的含量及常见对虾病毒(白斑综合征病毒(WSSV)、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、肠胞虫(EHP)、早期死亡综合症(EMS)、传染性肌肉坏死(IMNV))携带情况等为评价指标,发现养殖双齿围沙蚕重金属的含量明显低于野生沙蚕的含量,且野生双齿围沙蚕中As的含量严重超标;养殖双齿围沙蚕病毒检测结果均呈现阴性,说明不携带这几种病毒,而野生双齿围沙蚕部分样品WSSV、IHHNV和EHP的检测中呈现阳性,说明野生沙蚕可能携带该病毒。3.以养殖双齿围沙蚕为实验材料,利用采用硫酸铵分级沉淀、PhenySepharoseHP疏水层析、DEAE-SepharoseHp离子交换层析、HiTap-benzamidine FF(high sub)亲和层析等纯化步骤对双齿围沙蚕蛋白酶进行分离纯化,得到一种分子量约为32.5kDa电泳纯的蛋白酶,四种步骤的纯化倍数(Purification fold)分别为1.4倍、38.5倍、158.4倍和335.6倍,收率(Yield)分别为55.5%、18.2%、10.7%和5.3%。4.以纯化后的双齿围沙蚕蛋白酶为研究对象,对蛋白酶的部分分子学特征和酶学性质进行研究分析。结果发现,纯化后的双齿围沙蚕蛋白酶是一种丝氨酸类蛋白酶,且具有较强的纤维蛋白和纤维蛋白原水解活性的纤溶酶,最适温度为50℃、最适pH为8.0。
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