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目的:探讨脑出血应激状态下有无肠道屏障功能损害。
方法:将30只健康成年雄性SD大鼠,采用Nath改良法建立大鼠实验性脑出血模型,实验组15只注射大鼠自体动脉血,对照组15只注射生理盐水,两组大鼠术后不同时间点分为1h、3h、6h、12h、24h五个亚组,各亚组n=3;各时间点血标本的采集与D-乳酸测定:于实验的各时相点经腹主动脉取血4-5ml,肝素抗凝,离心分离血浆,-70°保持待测,采用分光光度法测定D-乳酸的浓度;小肠DAO活性测定:DAO活性(U/ml)=[组织匀浆液DAO含量(mg/ml)/组织匀浆液蛋白含量(ug/ml)]*0.05U/mg。首先取各时相点脑出血组及对照组大鼠小肠组织200mg置于匀浆器中,加入7倍体积磷酸盐缓冲液(0.1m1,pH=7.2),冰浴匀浆后离心(10000g,30min,4℃)。取匀浆上清液分别测定组织匀浆液中DAO含量及蛋白含量,计算得出DAO活性;组织病理学观察:取距回盲部5-8cm小肠组织,放入10%甲醛液中固定,制成光镜标本,直接观察肠绒毛等结构的变化,采用四级评分系统(0-3分)对小肠损伤情况进行判定。
结果:脑出血组大鼠小肠DAO活性明显下降,随时间变化持续下降,第6h、12h、24h脑出血组与对照组比较差异有统计学意义;脑出血后1h血浆D-乳酸水平即开始升高,后持续保持在高水平至24h后下降至略高于正常,第1h、3h、6h、12h脑出血组与对照组比较差异有统计学意义;光镜直接观察可发现脑出血应激状态下,小肠黏膜出现固有层水肿,中性粒细胞及淋巴细胞浸润,部分黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落,绒毛横径增宽,高度缩短,第3h、6h、12h脑出血组与对照组小肠损伤评分比较差异有统计学意义,肠道机械屏障功能受损,导致肠道通透性增高,12h损伤最明显,24h损伤开始恢复。
结论:应用Nath改良法建立大鼠实验性脑出血模型,操作简便,成功率高,能满足实验要求;小肠DAO活性、血浆D-乳酸水平测定反映脑出血应激状态下存在肠道屏障损害;通过组织病理学观察,脑出血时存在肠道机械屏障损伤。