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本研究从石斑鱼低温应激文库中筛选了补体C3和脂肪酸结合蛋白两个基因片段进行了研究。利用通过分子生物学、蛋白原核表达、免疫学、实时荧光定量技术和半定量技术等，克隆了这两个基因并构建了重组蛋白，进行蛋白纯化、抗体制备、同时研究了它们在环境应激中的作用。主要研究结果如下： 1.本研究筛选了石斑鱼低温应激文库，从中鉴定出一个和补体C3具有高度同源性的基因片段。通过RACE技术获得了该片段的全长序列，该序列包含1657个氨基酸，推测的分子量为184.56kDa。序列分析结果显示该序列和补体C3具有同样的关键保守序列，可以鉴定出该基因为石斑鱼补体C3。 2.半定量RT-PCR结果显示Ec-C3在肝脏中表达量最高，在其他组织中也有表达。进一步用real-timePCR技术研究了Ec-C3在石斑鱼pH和温度应激过程中，表达量明显升高。由这些结果可以推测，Ec-C3的表达量受到pH和温度的影响，在机体抗氧化机制中有一定的作用。 3.rC3B是补体C3中的一个功能片段，具有提高机体的免疫应激能力，通过在饲料中添加补体rC3B蛋白，研究其抗逆境能力。在本实验中，通过真核表达技术，得到了rC3B的重组蛋白。然后以斜带石斑鱼为研究对象，通过采用3种不同饲料配比(商业料；商业料+1wt％pPICZaA-33菌种的发酵液粉末；商业料+1wt％pPICZaA-rC3B-X-33菌种的发酵液粉末)进行投喂7周，并运用流式细胞仪，检测低温应激(14±0.5)℃后的血细胞数目、细胞凋亡数和呼吸爆发强度。实验结果表明，在低温6h应激后，C组(rC3B重组蛋白投喂)的细胞数目显著高于对照组(P<0.05)，呼吸爆发强度显著低于对照组(P<0.05)，细胞凋亡率显著低于对照组(P<0.05)，说明饲料中添加补体rC3B能够增强斜带石斑鱼的抗低温能力。 4.从石斑鱼肝脏中分离和鉴定了石斑鱼肝脏型脂肪酸结合蛋白(EcL-FABP)。EcL-FABP和从鸡，蛙，蝾螈，蜥蜴和鲶鱼肝脏中分离出来的FABPS具有较高的同源性。EcL-FABP的开放阅读框为14kDa，推测的等电点为8.5。 5.在毕赤酵母中成功表达了EcL-FABP蛋白，并将之纯化。通过免疫兔子获得了抗体。RT-PCR结果显示EcL-FABP只在肝脏和肠中表达。我们还检测到石斑鱼血细胞在受到应激后细胞内的呼吸爆发增强，并且检测到石斑鱼受到pH和温度应激后，EcL-FABP在mRNA和蛋白水平上的表达量都有明显的增高。这些结果显示，pH和温度应激可能会增强EcL-FABP的表达，并且EcL-FABP在机体应激中具有一定的抗氧化功能。 结论：本研究克隆了石斑鱼低温应急文库中的Ec-C3和EcL-FABP，并利用真核表达技术获得了他们的重组蛋白。这两个基因在石斑鱼受到环境应激后的表达量升高，由此可以推测这两个基因在石斑鱼的抗逆境中具有重要的作用。虽然本课题对这两个基因的研究还比较基础，但是该研究使人们进一步的了解了Ec-C3和EcL-FABP在鱼类应对环境应激中的作用，为以后的实际应用奠定了理论基础。