通过HPLC检测,FSN002内生真菌发酵液中主要含有3种待分离物质,这三种物质分别是楸灵素(化合物1,RT 21 min,最大吸收波长282 nm),酸降解产物(化合物2,RT 24 min,最大吸收波长306 nm)和黄色降解产物(化合物3,RT 28 min,最大吸收波长362 nm)。研究发现楸灵素对肝癌、脑癌等具有一定的抵抗效果,且不会损伤正常细胞。为优化楸灵素的HPLC检测条件,用Na Cl对发酵液样品进行了预处理,使得楸灵素保留时间提前,峰宽变窄,峰形更加对称。为分离纯化与鉴定这3种物质,本课题采用了树脂吸附,萃取分离,HPLC,LC-MS,NMR等研究手段,获得以下研究结果:(1)大孔树脂ADS-7较适合分离楸灵素。通过盐水-水-甲醇-饱和盐甲醇4步洗脱,将楸灵素浓缩纯化到盐甲醇溶液中供进一步分离,同时亲水性色素被除去。另外,采用聚酰胺、薄层层析和高效液相ODS制备柱制备相结合的方法对甲醇部分进行分离制备,获得色谱纯度为91.54%的化合物3,通过核磁和LC-MS-MS数据分析,该物质摩尔质量496.21 g/mol,分子式C28H32O8,英文名称为Trichodimerol,属聚酮类化合物,其空间结构对称,与黄酮有许多性质相似,可从红树林木霉菌和海洋微生物中获得该物质,其具有抗菌、抗流感等作用。(2)通过向发酵液样品中加入酸碱,调节电离平衡,改变其极性和油水两相分配系数,可以实现楸灵素的萃取分离与浓缩。通过考察溶剂种类、萃取溶剂与物料的体积比以及萃取体系的pH值,以HPLC为检测手段,建立分离纯化楸灵素的方法工艺。楸灵素在4中有机溶剂中的油水分配系数大小依次是:乙酸乙酯>氯仿>二氯甲烷>甲苯;酸萃取时萃取剂体积过小,楸灵素存在降解,萃取过程中,随着pH增大,楸灵素在油水两相中分配比值减小,在pH 4.5发酵液-乙酸乙酯1:1和pH 9氢氧化钠-乙酸乙酯1:3条件下进行萃取反萃取,楸灵素的萃取收率达78.28%,对应楸灵素色谱纯度97.7%,这种萃取工艺对楸灵素的分离纯化效果明显。