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目的：通过构建BTG3过表达结肠癌SW480细胞系，由此观察BTG3过表达对结直肠癌细胞增殖、细胞周期及转移浸润的影响，并探讨其可能存在的机制。借此判断结直肠癌的发生和转移是否以BTG3为基因靶点，为研究结直肠癌的发病机制提供新的思路和实验方法，为临床监测肿瘤发生发展提供重要的理论依据。第一部分的研究针对结直肠癌组织标本及相关临床病理因素进行探讨，揭示BTG3的临床意义。第二部研究分构建稳定、高表达BTG3基因的结肠癌细胞系，为探索BTG3基因高表达在结直肠癌中的生物学功能提供稳定实验细胞株。第三部分研究BTG3基因过表达体外对结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期及浸润转移的影响。第四部分研究基于Wnt/β-catenin信号通路，对BTG3过表达抑制结肠癌SW480细胞增殖、干扰细胞周期、抑制浸润转移机制进行探讨。 方法：⑴应用免疫组化及Western Blot方法分别检测石蜡包埋组织中及新鲜癌组织中的BTG3蛋白表达水平；⑵对不同的结肠癌细胞系用qRT-PCR与Western Blot方法检测BTG3的表达水平，采用BTG3表达最低的细胞系应用于后续试验；⑶采用脂质体法构建获得pcDNA-BTG3，以空载的载体pcDNA-Vector为对照，将构建的载体转入选定的结肠癌细胞系，通过抗生素G418筛选，获得稳定转染细胞系和Vector细胞系；⑷对稳转的细胞系及对照细胞系的增殖活性采用MTT法及Brdu渗入法，对于调控细胞的周期相关蛋白采用qRT-PCR及Western Blot方法检测其表达水平，而对细胞周期采用流式细胞仪进行检测；⑸应用Transwell方法检测BTG3过表达的结肠癌SW480细胞系迁移侵袭能力；⑹免疫荧光检测EMT分子标志物E-Cadherin和Vimentin的表达，针对BTG3过表达对结肠癌细胞EMT分子标志蛋白和Wnt/β-catenin信号通路蛋白的影响，采用Western blot方法进行检测。 结果：①免疫组化法在正常结直肠组织及癌组织中BTG3蛋白均可见表达，从癌细胞的细胞质及正常黏膜的固有腺体中可发现BTG3蛋白定位于此;正常组织中BTG3蛋白的表达水平高于结直肠癌组织，应用Western Blot检测后证实结果一致，差异具有统计学意义(P＜0.05);针对不同的临床及病理参数，我们发现年龄、性别、肿瘤的位置、浸润深度是否阳性及有无淋巴结转移与BTG3的蛋白表达水平无统计学意义(P＞0.05）;肿瘤的具体分期也与BTG3的表达水平无关(P＞0.05);但静脉侵袭的结直肠癌病人BTG3蛋白表达水平高于未发生静脉侵袭的病人，差异具有统计学意义(P＜0.05)。②获得稳定高表达BTG3的结肠癌SW480细胞株，转染细胞中BTG3 mRNA水平和蛋白水平与对照细胞相比明显增高，而且长时间培养转染的细胞株遗传性状稳定。③BTG3过表达结肠癌SW480细胞对比对照组细胞增殖能力减弱，增殖相关蛋白PCNA和Ki67蛋白表达下降，处于G1细胞周期的比例明显升高，有关细胞周期的蛋白Cyclin D1、Cyclin E1表达水平显著下降，细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27蛋白表达水平提升明显，差异有统计学意义(P＜0.05);结肠癌SW480细胞的迁移侵袭能力因为BTG3的高表达而降低，对照组细胞波形蛋白(Vimentin)表达水平高于BTG3过表达细胞组，而其黏附蛋白E(E-cadherin)表达水平则明显低于BTG3过表达细胞组。④高BTG3的表达，可抑制结肠癌SW480细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、Wnt3a、active-β-catenin、p-GSK3β(Ser9)蛋白表达水平，而促进GSK3β蛋白水平的表达;GSK3β的特异抑制剂SB-216763处理后能明显升高active-β-catenin蛋白表达及p-GSK3β/GSK3β比率，能够逆转BTG3过表达对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。 结论：⑴BTG3蛋白在结直肠癌组织中低表达，结直肠癌的发生发展可能与结直肠癌组织中BTG3的表达水平下降有关。⑵BTG3过表达诱导结肠癌SW480细胞周期阻滞于G1期，下调结肠癌SW480细胞Cyclin D1、Cyclin E1表达，上调p27表达，沉默p27基因后，G1期阻滞减弱，说明BTG3过表达可能通过调控p27阻滞结肠癌SW480细胞于G1期。⑶BTG3过表达抑制结肠癌SW480细胞的侵袭及转移，可能是通过促进结肠癌细胞E-cadherin表达，降低Vimentin表达，抑制EMT实现。⑷BTG3过表达降低结肠癌SW480细胞Wnt1、Wnt3a、active-β-catenin的蛋白水平及p-GSK3β(Ser9)/GSK3β比率，抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活。⑸GSK3β的特异抑制剂SB-216763处理后能明显升高active-β-catenin蛋白表达及p-GSK3β/GSK3β比率，能够逆转BTG3过表达对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。⑹BTG3过表达对结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期、细胞侵袭转移的影响通过Wnt/β-catenin信号通路实现。