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研究背景与目的: SET7/9是蛋白赖氨酸甲基转移酶(protein lysine methyltransferases，PLMTs)家族成员，除了能使组蛋白H3第四位赖氨酸(lysine4 of histone3，H3K4)单甲基化外，更重要的是使一些转录因子、肿瘤抑制因子、膜相关受体等非组蛋白单甲基化[1]。p53是细胞内重要的转录因子，参与调控细胞生长、分化和个体发育等生命活动。近来发现SET7/9能通过甲基化第372位赖氨酸(K372)调节p53稳定性，从而影响凋亡[2]。已知包括肺癌在内的50％以上的恶性肿瘤存在p53基因异常如缺失或突变，那么在p53缺失的恶性肿瘤细胞中，SET7/9是否对凋亡也有影响，如果有又是通过何种途径实现的呢？本项目以p53缺失的人肺癌细胞为实验对象探讨了上述问题。 实验方法与结果: （一）观察SETW9表达变化对p53缺失的人肺癌细胞H1299凋亡的影响。先用将空载质粒（Control组）、SET7/9表达质粒（SET7/9组）或SET7/9表达抑制质粒（shRNA-SET7/9组）分别转染H1299细胞。Western Blot法检测SET7/9表达变化后，用AnnexinV-FITC/PI双染法与流式细胞术、细胞Hoechst33342染色检测凋亡率。结果显示，与Control组[(12.11±4.41)％]比较，H1299细胞过表达SET7/9后凋亡率[(4.36±0.63)％]明显降低，而抑制SET7/9表达则凋亡率[(16.64±1.49)％]升高，表明SET7/9表达变化对p53缺失人肺癌细胞存在凋亡效应。 （二）观察SET7/9对H1299的凋亡效应与p53途径的关系。在上述实验基础上共转染野生型p53表达质粒，用或不用阿霉素(Adr)激活p53途径，相同方法检测凋亡率。结果显示，野生型p53表达质粒单独转染[(21.70±3.80)％]或加用Adr处理[(24.84±2.11)％]均明显增加凋亡率;无论是否与野生型p53表达质粒(p53/pIRES2-Zs1)共转染、且是否在共转染基础上用Adr处理细胞以进一步激活p53途径，SET7/9过表达均使H1299细胞凋亡率[Adr处理(10.38±1.46)％ vs(7.80±0.46)％、Adr未处理(7.80±0.46)％ vs(4.36±0.63)％]明显降低，而SET7/9表达受抑均增加H1299细胞凋亡率[Adr处理(29.42±2.83)％ vs(24.32±3.00)％、Adr未处理(24.32±3.00)％ vs(16.64±1.49)％]，但shRNA-SET7/9质粒与p53表达质粒共转染的效应，无论细胞是否用Adr处理，均未达到两质粒单独转染时诱导凋亡效果之和。这些结果提示SET7/9与p53对H1299细胞凋亡的影响呈非交互的独立作用。 （三）采用P53缺失的A549人肺癌细胞重复上述实验。实验结果趋于一致，进一步证实SET7/9对P53缺失的人肺癌细胞的凋亡效应。 （四）以H1299细胞为研究对象探讨SET7/9对P53缺失人肺癌细胞凋亡效应的分子机制。Western Blot法检测SET7/9表达变化后转录因子和凋亡相关蛋白P21、P65、E2F1等含量，发现E2F1变化趋势与H1299凋亡率变化相同，即SET7/9表达增加时E2F1含量减少，凋亡率降低;SET7/9表达受抑则E2F1含量增加，凋亡率升高。已知SET7/9可甲基化E2F1，促使其泛素化降解，降低E2F1的非p53依赖型途径激活程度而减少凋亡[3，4]。因此，本研究结果提示SET7/9可能通过E2F1的非p53依赖型途径调控P53缺失人肺癌细胞的凋亡效应。 结论: (1) SET7/9表达变化对p53缺失的人肺癌细胞凋亡具有影响，SET7/9表达增加会抑制凋亡，SET7/9表达受抑会诱导凋亡。 (2)这种影响与p53途径呈非交互的独立作用，即非p53途径依赖性。 (3) SET7/9对p53缺失的人肺癌细胞凋亡的影响可能是通过E2F1介导的非p53依赖性凋亡途径实现的。