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Viperin(virus inhibitory protein,endoplasmic reticulum associated,interferon-inducible,Viperin)属于干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes,ISGs)家族,是一种在免疫反应中直接发挥作用的效应分子。其蛋白结构主要可分为N端、SAM域中间端及C端,除N端在物种间差异性较大外,其余两部分序列高度保守。目前已知Viperin可通过直接与病毒蛋白相互作用或阻断病毒出芽途径等方式发挥抗病毒功能。本研究以鸭、鹅血基因组为模板分别扩增鸭、鹅Viperin全长序列,得到鸭Viperin编码区(Coding sequences,CDS)序列长1092核苷酸(Nucleotides,nt),编码363氨基酸(Amino acid,aa);鹅Viperin部分CDS序列长879 nt,编码292 aa。通过对鸭、鹅Viperinaa序列比对,发现除鹅Viperin缺失的N端外,两序列SAM域中间端及C端序列相似度极高。系统进化树分析发现哺乳类、爬行类、两栖类、禽类、鱼类的Viperin分别聚为一簇,且在禽类上鸭、鹅Viperin亲缘性最近。基于已获得的序列,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Timequantitative Polymerase Chain Reaction RT-q PCR)法探究鸭、鹅Viperinm RNA在不同刺激剂刺激下的表达变化情况。分别检测鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis A virus,DHAV)、鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)及鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)刺激鸭胚成纤维细胞(Duck embryo fibroblast,DEF)12 h后的细胞中鸭Viperinm RNA转录水平的变化情况。经鉴定,4种病毒均能使Viperinm RNA表达量显著上调。同时,分别检测DTMUV、小鹅瘟(Goose parvovirus virus,GPV)、H9N2(Avian influenza virus H9N2,H9N2)及Toll-样受体(Toll-like receptor,TLR)激动剂ODN2006(Oligodeoxynucleotides)、LPS(Lipopolysaccharide)、R848(Resiquimod)及Poly I:C(Polyinosinic Acid-Polycytidylic Acid)刺激鹅外周血单核细胞(PBMC)6 h后的细胞中鹅Viperinm RNA转录水平的变化情况。结果显示,3种病毒及4种激动剂均能使Viperinm RNA表达量显著上调。构建pc DNA3.1(+)-鸭Viperin及p EGFP-C2-鸭Viperin真核表达质粒以研究鸭Viperin的蛋白大小及在细胞内定位情况,并在DEF上探究鸭Viperin蛋白与DTMUV间关系。经鉴定,鸭Viperin蛋白为42 k Da,且在DEF及BHK21细胞中均仅存在于胞质。将鸭Viperin重组质粒转入DEF 12 h后,接种DTMUV,并对细胞中DTMUV基因组拷贝数、病毒TCID50及病毒荧光进行检测。结果显示:在DTMUV病毒感染DEF12、24及36 h,鸭Viperin蛋白均能显著抑制DTMUV增殖;除病毒基因组拷贝数外,在病毒感染DEF36 h后,还分别检测了病毒TCID50及病毒荧光量,结果也一致。因此,初步鉴定出鸭Viperin确实具有抗DTMUV活性。综上,本课题克隆了鸭、鹅Viperin序列,通过序列比较及进化树构建,鉴定出两序列具有很近的亲缘性;通过免疫刺激剂刺激,鉴定了鸭、鹅Viperin的免疫学特性;并初步验证出鸭Viperin蛋白具有抗DTMUV活性。