微量抗原浓度条件下C1q-ELISA检测方法的建立与应用

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:studied1234
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究以纯化的H1N1亚型猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)作抗原,按常规制取单克隆抗体的方法筛选到3株能稳定分泌抗体的杂交瘤,分别命名为ⅢF6A4C10,ID4A3D8,IC3H5H4。其中ⅢF6A4C10只与H1N1 SIV反应,不与H5N1AIV和重组的H1N1 SIV HA蛋白反应;ID4A3D8,IC3H5H4与H1Nl SIV、H5N1 AIV和重组的H1N1 SIV HA蛋白均有反应。亚型鉴定结果表明,ⅢF6A4C10的重链属于IgG1亚型,轻链为κ型;ID4A3D8重链属于IgG2a亚型,轻链为κ型;IC3H5H4重链属于IgG2b亚型,轻链为κ型。经间接ELISA测定,3株单抗效价为:细胞培养上清均为1:6,400,腹水均为1:12,800。单抗稳定性实验结果表明,3株单克隆抗体细胞的稳定性好。本实验将IgG1亚型单抗mF6A4C10、ⅢC2D1D4、IE6E4的腹水纯化以备用。 在本实验室建立C1q与抗原抗体复合物反应的C1q-ELISA方法的基础上,本研究从以下几个方面将C1q-ELISA方法进行了优化,包括酶标板、显色底物、抗体包被时间、C1q与抗原抗体复合物反应的温度和时间、C1q工作浓度、生物素标记抗人C1q和抗鼠C1q、绵羊抗人C1q与兔抗体绵羊IgG-HRP、SA-HRP稀释度。在优化的条件下,实验结果表明C1q-ELISA检测方法的灵敏度成功地提高至100-1,000 pg/mL。其中抗人TNFa单抗和抗人IL-1a单抗C1q-ELISA检测灵敏度达到100 pg/mt;抗人IL-4单抗C1q-ELISA检测灵敏度达到1,000 pg/mL。细胞培养上清的细胞因子检测实验结果表明,经Con A、Tsn刺激人辅助性T细胞产生含有人IL-4细胞因子的细胞培养上清分别稀释9倍、3倍时均能被抗人IL-4单抗有效检测出来。优化后的C1q-ElISA方法的检测灵敏度达到了皮克级,且成功运用优化的C1q-ELISA方法检测细胞培养上清中的细胞因子。 本研究还比较了人C1q和鼠C1q在结合鼠IgG方面的特性,发现差异显著:与5株鼠IgG1的结合结果表明,在鼠IgGl抗体低浓度(<1μg/mL)时,人C1q与鼠C1q均与之不结合;而在鼠IgG1抗体高浓度(>10μg/mL)时,人C1q与之结合较弱或几乎不结合,而鼠C1q则表现出很强的结合特性,与人C1q差异显著;与鼠IgG2a、IgG2b的结合实验结果表明,在鼠IgG2a和IgG2b抗体检测浓度中,人C1q、鼠C1q均能与之有效结合,但人C1q所表现出来的结合特性均明显强于鼠C1q。
其他文献
随着各行各业的迅速发展,铝及铝合金材料的应用也越来越广泛.随之迩来的问题就是如何增强铝及铝合金材料的抗腐蚀的能力.但常规的铝阳极氧化膜由于表面电阻大而无法满足产品
建立健全社会保障体系,是保障和改善民生、建设和谐社会的基础工程。党的十七大提出了“加快建立覆盖城乡居民的社会保障体系”的战略目标,《社会保险法》、国家“十二五”发
加强理财教育的必要性和意义随着我国经济的发展和人民生活水平的不断提高,孩子们手里的零花钱逐渐多了起来。如何引导儿童和青少年学生科学、合理地花钱已成为摆在我们面前
利用线程技术实现水电站监控系统的实时通信,讨论了串口异步通信技术,开发了基于Windows95的水电站网络监控系统的网络通信模块. Utilize the thread technology to realize the real-ti
本试验结合地下滴灌技术将磁化处理应用于紫花苜蓿的生产栽培灌溉,并通过2年田间试验及室内分析测定,研究磁化处理对水理化性质、灌溉处理对紫花苜蓿生长和生产性状的影响,探讨
温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum(Westwood)(半翅目:粉虱科)是世界上农作物中最危害最大的害虫之一,由于其直接取食和传播植物病毒而导致作物巨大损失。温室白粉虱的寄主选择
广聚萤叶甲是近年传入我国的北美昆虫,它主要取食外来入侵豚草。为摸清其在新的环境中对靶标豚草和非靶标近缘植物的影响,就广聚萤叶甲在不同条件下对豚草和其他几种近缘植物
文章对船用电机运行期间升温过高问题展开探讨,从引发电机温升过高的内外部原因、温升过高对电机影响及解决策略三方面来进行阐述,分别从有效的冷却方法,电机表面防腐涂料设
摘要: 新闻报道语言日新月异,时刻走在语言的前沿。新闻报道语体以书面语为主,有鲜明的特色:新词、外来词、缩略词大量使用;运用条件式、直接引语以及多种修辞方法;文章标题力求新颖醒目等。  关键词: 法语 新闻报刊语体 修辞    电视、报纸、网络已成为人们了解最新发生的各种事件、当今社会动态、最新的科技成果等信息的重要工具。在这些媒介上的文章也五花八门,这里主要谈谈在社论、新闻报道、时事述评中所使用