【摘 要】
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目的:1.检测PFP和GrB在口腔鳞癌中的表达情况,分析其表达水平与口腔鳞癌病理学分级、临床分期、颈淋巴转移之间的关系,探讨PFP和GrB表达之间的规律.2.构建PFP和GrB共表达的质
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目的:1.检测PFP和GrB在口腔鳞癌中的表达情况,分析其表达水平与口腔鳞癌病理学分级、临床分期、颈淋巴转移之间的关系,探讨PFP和GrB表达之间的规律.2.构建PFP和GrB共表达的质粒,并在真核细胞中获高效表达.3.将PBI-PFP-GrB质粒导入口腔鳞癌特异性CTL,检测PBI-PFP-GrB质粒在转基因CTL中的表达水平.4.观察转基因CTL的靶细胞杀伤活力,为口腔鳞癌的免疫基因治疗提供新的路径.该文分三部分:第一部分:PFP/GrB在口腔鳞癌免疫防御中的作用.结论:PFP与GrB蛋白表达水平与口腔鳞癌的病理学分级正相关,与临床分期、颈淋巴转移负相关.TIL中PFP与GrB蛋白并不一定同时高效表达,富含GrB的TIL并不一定富含PFP,反之亦然.可见,PFP/ GrB途径在口腔鳞癌的免疫防御中发挥重要作用.第二部分:PBI-PFP- GrB质粒的构建及其在Cos -7中的表达.结论:采用真核表达载体PBI/Tet-On诱导系统,利用PCR,双酶切及连接等分子生物学技术,可以构建PBI-PFP- GrB质粒,并在真核细胞Cos-7中获得联合表达.该实验为研究CIL在口腔鳞癌中的杀伤机制、提高口腔鳞癌免疫基因治疗效果奠定了基础.第三部分:转基因CTL对舌鳞癌细胞系SCC4的杀伤作用.结论:(1)采用同HLA个体的PBMC为原代细胞,有SCC4细胞裂解物为抗原刺激物,能建立特异性较高且细胞毒性较强的CTL,在IL-2的作用下能在体外大量扩增.(2)装PBI-PFP-GrB/Tet-On质粒系统转染SCC4特异性CTL,能显增加CTL内PFP和GrB的蛋白表达水平,增强CTL的细胞毒活性.(3)CMA(PFP抑制剂)能显著地抑制CTL对SCC4的杀伤能力,而Brefeldin(Fas抑制剂)仅使CTL对SCC4的杀伤率下降了10﹪.可见,PFP/GrB途径在特异性CTL杀伤靶细胞的过程中占主要地位.
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