乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是乳腺癌发生发展的最关键致病因素之一,其致病机制仍有待进一步探讨。目前在所有治疗方法中,手术切除仍然是治疗乳腺癌最有效的方法。然而近年来越来越多的临床和实验室研究发现,围术期所用的麻醉方式及多种麻醉药物,尤其是围术期大量使用的阿片类镇痛药,可能会影响乳腺癌的生长、侵袭和转移。目的利用IGF-1致人乳腺癌细胞(MCF-7)恶性增殖模型,观察多种常用麻醉药物对该作用的影响;深入探讨IGF-1系统与阿片系统,主要是mu阿片受体(MOR)之间的交互作用,探究MOR在IGF-1致乳腺癌发生发展机制中的作用,为临床上制定更加有利于乳腺癌患者预后的麻醉方案,合理使用阿片类药物提供理论依据。方法第一部分:体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,通过Cell Counting Kit(CCK-8)细胞增殖实验分别检测丙泊酚、依托咪酯、咪达唑仑及吗啡单独/联合IGF-1刺激MCF-7后细胞的增殖情况;以Western Blot检测上述药物单独/联合IGF-1刺激对Akt活化水平的影响。第二部分:体外培养表达MOR的人乳腺癌细胞MCF-7,采用Western Blot检测IGF-1刺激对细胞内MOR蛋白表达的影响;应用外源性MOR激动剂(DAMGO)和拮抗剂(MNTX)干预MOR的活化状态,将细胞分为7组:阴性对照组、IGF-1组、DAMGO组、MNTX组、IGF-1+DAMGO组、IGF-1+MNTX组、IGF-1+DAMGO+MNTX组,分别采用流式细胞术和CCK-8法、Transwell细胞迁移实验、Matrigel基质胶侵袭实验检测MOR活化对IGF-1所致细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并应用免疫荧光标记激光共聚焦显微镜观察IGF-1与DAMGO单独/联合刺激下,MOR从细胞膜表面内吞入胞质的情况;采用Western Blot检测各组中p-Akt、Akt、p-Src和Src的表达水平,并应用Ly294002抑制PI3K/Akt信号通路,通过CCK-8检测IGF-1和/或DAMGO刺激下细胞增殖情况的变化。结果1.丙泊酚对IGF-1引起的细胞恶性增殖没有促进作用,而大剂量的咪达唑仑、依托咪酯与吗啡均能进一步上调IGF-1引起的细胞增殖及p-Akt的表达水平,吗啡本身不改变细胞增殖与p-Akt的水平。2.IGF-1能够上调MCF-7细胞中MOR的表达,这种作用具有剂量和时间依赖性;采用IGF-1和DAMGO联合刺激MCF-7后,细胞的增殖、迁移及侵袭能力均明显高于对照组及IGF-1单独刺激组,且上述作用可以被MNTX抑制。3.在有IGF-1存在的条件下,DAMGO能够引起更多的MOR从细胞膜上内吞进入细胞质。在IGF-1与DAMGO的联合作用下,MCF-7细胞中Akt及Src蛋白的活化水平均显著高于对照组及IGF-1单独刺激组,该作用同样可以被MNTX抑制。应用Ly294002阻断PI3K/Akt信号通路能够抑制由IGF-1和DAMGO诱导的MCF-7细胞恶性增殖。结论多种麻醉药均能增强IGF-1致乳腺癌细胞恶性增殖的作用;IGF-1能够上调人乳腺癌细胞中MOR的表达,高表达的MOR在内源性阿片肽或外源性激动剂的刺激下内吞入细胞质,通过提高Src/Akt信号通路在IGF-1作用下的激活水平,最终协同IGF-1共同促进MCF-7细胞的恶性增殖、迁移及侵袭。