大肠肿瘤相关基因SNC44/li结构、表达和功能分析

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目的:1.研究SNC44cDNA克隆的结构(全长序列测定、开放阅读框分析、融合蛋白制 备);2.采用定量RT-PCR、NorthernBlot方法研究SNC44/li基因在大肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤组织中的表达及在这些肿瘤发生、发展中的潜在意义;3.用原位杂交方法研究SNC44/Ii基因在正常大肠粘膜与大肠癌组织的表达定位;4.探讨SNC44/Ii基因正义、反义重组质粒转染肿瘤细胞对其生长曲线、细胞周期和CD44、pgp等相关蛋白表达的影响或调控.第一部分:SNC44cDNA克隆结构分析;第二部分:SNC44/Ii基因在不同组织中表达和定位研究;第三部分:SNC44/Ii基因融合蛋白的制备;第四部分:SNC44/Ii基因的功能研究.结论:1.SNC44cDNA克隆的全长序列分析表明:(1)SNC44cDNA共130bp,与人类HLAⅡ类抗原相关恒定链(Ii)mRNA99﹪同源;开放阅读框与Ii(P33)完全一致,SNC44就是Ii基因.(2)SNC44/Ii基因上有651bp的ORF,编码217个氨基酸;该研究制备了54KD的SNC44/Ii(33KD)-GST(21KD)融合蛋白.2.SNC44/Ii在部分肿瘤及正常组织中的表达研究表明:(1)SNC44/Ii大肠癌中低表达(P<0.05);随着Dukes分期的进展有进一步降低的趋势.(2)SNC44/Ii在胃癌、乳腺癌有低表达的趋 势(P>0.05).(3)SNC44/Ii在肿瘤细胞系中表达水平较低.(4)RT-PCR、NorthernBlot结果显示SNC44/Ii在正常大肠、胃和乳腺组织中均有大量表达.3.原位杂交证实:SNC44/Ii在正常大肠粘膜上皮、肿瘤细胞中均有表达.4.S对NC44/Ii功能的探索表明:(1)SNC44/Ii对生长 曲线和细胞周期无影响.(2)SNC44/Ii可促进大肠癌细胞株SW620Pgp蛋白的表达.(3)SNC44/Ii有抑制大肠癌细胞株SW620CD44V蛋白表达的趋势.(4)SNC44/Ii对临床预后判断有潜在价 值.
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