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文中首先说明了鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)的病因和该病传染情况。
本文研究应用本实验室分离、鉴定的IBDV上海超强毒株SH95,经口服和滴鼻感染IBDV非免疫鸡,采集发病鸡的法氏囊,通过差速离心和密度梯度超速离心提取、纯化病毒,应用本实验已建立的蛋白酶K消化法获得了该病毒的全长基因组dsRNA。
为了获得IBDV上海超强毒株VP2-4-3全长基因,在应用蛋白酶K消化获得高纯度的dsRNA后,参照本实验室已建立的方法应用随机引物合成了Cdna第一链。
为了构建鸡传染性法氏囊病病毒超强毒VP2-4-3基因的真核表达质粒,应用MluⅠ和XbaⅠ对获得的VP2-4-3基因进行双酶切,通过基因重组技术,将IBDV SH95的多聚蛋白VP2-4-3基因克隆入带有原核复制原件和真核表达启动子的表达载体Palter-MAX中,构建成功真核表达质粒Palter-MAX-VP2-4-3。
通过脂质体介导,将纯化的Palter-MAX-VP2-4-3质粒转染Marc-145细胞,在细胞中观察到有特异蛋白质的表达。