快速方便检测低浓度肿瘤抗原有很重要的意义,现在已经有很多电化学检测方法已经用于分析检测抗原,但是,它们在对抗原与抗体结合的形貌特征及一些动力学参数的研究上受到了一定的限制。为了研究更高效检测肿瘤抗原的方法,本论文主要做了两部分的工作,一是利用扫描电子显微镜(SECM)对Ramos肿瘤细胞上的抗原CD10进行了研究；二是利用石英晶体微天平(QCM),分别以纳米金和磁珠为载体放大信号,对抗原CD10进行了研究；除此之外,本文还基于DNA滚环放大信号的方法利用QCM构建了一种高灵敏度的生物传感器,实现了对溶菌酶的检测。现介绍如下：1、构建了灵敏的免疫传感器,本文介绍了一种运用扫描电化学显微镜检测分析抗原和抗体特异性结合形貌特征的新方法,通过构建三明治结构化学传感器,首先,抗体和金电极以金巯键化学键相连接,然后将抗原及以纳米金粒子为载体修饰有辣根过氧化物酶和二抗的混合溶液层层组装到金电极上,将修饰好的金电极进入工作溶液(1.0mMFe2+/Fe3+)中,对基底电极施加0.5V的电压,就会通过探针电极观测到电流的变化,与此同时,抗原和抗体特异性结合的形貌特征图也会形成。纳米金粒子以其良好的生物相容性在构建传感器中得到了应用。而试验中的辣根过氧化物酶具有粒径小、稳定性高的特点,在溶液中,可以催化过氧化氢将Fe2+氧化成Fe3+。在最佳实验条件下,通过对修饰电极的扫描,我们发现修饰部位和未修饰部位的电流值有着明显的区别,抗原CD1O的标准曲线的线性范围为1.0×10-11-6.0×10-11M,其方程为Y=a+bX=0.0313+5.134X(X为抗原CD10的浓度,10-10M,Y是电流的增长范围,△Icurrent),R=0.9998。抗原CD10的检测限可以用36(6为空白溶液的标准偏差n=11)得到为4.38×10-12M。因此,本实验以抗原CD10为例,提供了一个直观检测抗原和抗体特异性结合的新方法。2、在结合纳米金粒子和抗原CD10的前期实验的基础上,我们又提出了以QCM来检测抗原的新方法。在这种方法中,我们分别比较了利用纳米金粒子和磁珠作为载体进行检测的不同之处。同时,我们将DNA和抗原CD10同时修饰到纳米金粒子上,利用DNA杂交技术,使发卡DNA不断的打开并且连接到纳米金上以增大反应的信号。实验结果表明,在最佳的反应条件下,当其他条件相同时,利用纳米金连接DNA的频率变化值比较大,可以利用这种方法来检测抗原。3、在以上工作的基础上,结合最新文献,我们探索了一种检测溶菌酶的新方法。与前两个实验相比,此次实验的重点不再是对抗原的检测,而是基于DNA滚环方法可以放大检测信号,利用QCM实现对溶菌酶的检测。其原理是将捕获DNA修饰到芯片中去,并滴加其适体链使部分杂交互补,当滴加溶菌酶的时候,由于溶菌酶适体链的作用会使捕获DNA和其适体链部分解离。同时,我们加入环状引发链DNA,在聚合酶的作用下,引发链会以捕获DNA为模版,不断的滚环复制。当反应进行到一定的程度,我们将芯片当入QCM中,并通入用亲和素修饰的DNA,由于亲和素修饰的DNA上有与增长的DNA长链有互补的碱基,因此,它会不断的结合到芯片上去,进一步提高检测的信号。由于当芯片上的吸附层质量增加时,检测到的频率信号的变化值就会发生相应的变化,因此,我们可以实现对溶菌酶的检测。