圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成相关基因的结构与功能

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mayy01
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  本论文采用双交换基因破坏策略得到基因阻断突变株,进行突变株代谢产物的生物活性检测和HPLC分析;sanS基因在大肠杆菌异源表达并纯化,测定了其ATP水解酶活性,同源性比较揭示,sanU的编码产物与Actinoplanesfriuliensis中的谷氨酸变位酶S亚基具有55﹪的一致性,前期克隆到的基因sanV编码产物与Actinoplanesfriuliensis中的谷氨酸变位酶E亚基具有55﹪的一致性,sanU和sanV可能编码一个谷氨酸变位酶。   本文将黑色素合成基因的启动子连接sanU和sanV后克隆在质粒pSETl52上并转化野生型圈卷产色链霉菌,得到增加一个拷贝sanU和sanV工程菌株。用RT-PCR分析了sanU和sanV的转录情况,发现工程菌株sanU和sanV的转录水平比野生株提高了1倍左右;野生型圈卷产色链霉菌和工程菌株分别在SP液体培养基中发酵,经HPLC分析,工程菌株的尼可霉素产量比野生株提高了1.8倍;生长动力学及尼可霉素产生动力学的研究表明:工程菌株的尼可霉素产量不是因为单位体积生物量增加而引起,因此推测:sanU和sanV基因编码的谷氨酸变位酶在圈卷产色链霉菌(S.ansochromogenes)尼可霉素生物合成途径中催化重要的限速步骤。
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