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【目的】 1、体外进行rBMSCs（ratbone marrow stromal cells,大鼠骨髓间充质干细胞）的分离、培养、鉴定； 2、rBMSCs与ALN/CS/nHA（新型阿伦磷酸钠-壳聚糖-纳米羟基磷灰石支架材料）共培养并成骨诱导，研究用ALN/CS/nHA与种子细胞BMSCs复合构建组织工程骨的可行性。 【方法】 1、体外进行分离、培养、鉴定rBMSCs：贴壁培养法分离和培养rBMSCs，通过FCM（Flow cytometry，流式细胞仪）鉴定rBMSCs表面抗原分子（CD73、CD90、CD105、CD34、CD45）的表达率检测所得rBMSCs的纯度； 2、rBMSCs复合ALN/CS/nHA体外构建组织工程骨的实验研究：a、获取p3代rBMSCs，与ALN/CS/nHA进行体外复合培养，倒置显微镜下观察细胞生长情况，MTT法进行测定rBMSCs的增殖能力、SEM（Scanning electron microscope，扫描电镜）下观察细胞在材料表面的黏附情况，总体评估细胞与支架材料之间的相容性。b、rBMSCs与ALN/CS/nHA体外成骨诱导，于第3、7、10天检测细胞内ALP含量，第3、6、9、12、15天检测上清液中Ⅰ型胶原蛋白的含量。对比分析新型材料有无促进rBMSCs成骨作用。 【结果】 1、贴壁培养法成功分离、培养rBMSCs，经流式细胞仪检测，CD90，CD105，CD73阳性率达到95％，CD34、CD45的阳性表达率在5%以下； 2、细胞生长特性：rBMSCs与ALN/CS/nHA复合培养，随着培养时间的延长，三组细胞的数量逐步提高，最初3d实验组、对照组和空白组细胞均处于生长潜伏期，第3天后各组细胞数量明显增加，第6天后各组细胞进入生长平台期，重复测量方差分析，显示组间无差别(P>0.05)。SEM结果显示细胞在ALN/CS/nHA表面黏附良好；3、经成骨诱导后第7、14天的细胞材料复合物均有ALP(Alkaline phosphatas，碱性磷酸酶)、Ⅰ型胶原蛋白表达，实验组细胞ALP及Ⅰ型胶原蛋白表达量总体高于对照组及空白组。重复测量方差分析，显示组间有差别(P<0.05)。 【小结】 1、大鼠骨髓中可以分离、培养出体外培养条件下生长良好的且具有分化潜能的 rBMSCs，第3代细胞在成骨诱导培养下可以向成骨细胞分化； 2、rBMSCs可与ALN/CS/nHA良好粘附并增殖，且保持正常细胞形态。ALN/CS/nHA具有良好的细胞相容性。体外培养时ALN/CS/nHA对 rBMSCs的增殖有促进作用； 3、rBMSCs与ALN/CS/nHA共培养下诱导成骨，分泌出的ALP，Ⅰ型胶原含量高于对照组及空白组，数据分析有统计学意义，证实了ALN/CS/nHA是一种良好的骨组织工程支架材料。