【摘 要】
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当前新冠疫情形势仍然在全球流行,根据目前形势来看,疫情仍将持续比较长的时间,甚至今后还要与人类共存,所以我国随时都可能因为传染源的引入而导致新冠疫情在国内流行,甚至暴发流行。核酸检测是目前全球各国政府规定的新冠病毒诊断的科学依据。因此,新冠病毒核酸高效提取方法、精准的检测方法的建立及优化成为行业专家学者聚焦的热点。本文建立了硅质滤芯法核酸RNA提取、柱离心法核酸RNA提取、磁珠法核酸RNA提取三种
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当前新冠疫情形势仍然在全球流行,根据目前形势来看,疫情仍将持续比较长的时间,甚至今后还要与人类共存,所以我国随时都可能因为传染源的引入而导致新冠疫情在国内流行,甚至暴发流行。核酸检测是目前全球各国政府规定的新冠病毒诊断的科学依据。因此,新冠病毒核酸高效提取方法、精准的检测方法的建立及优化成为行业专家学者聚焦的热点。本文建立了硅质滤芯法核酸RNA提取、柱离心法核酸RNA提取、磁珠法核酸RNA提取三种核酸提取方法,以及荧光PCR检测方法和数字PCR检测方法两种核酸诊断方法,并进行了临床对比验证。实验结果表明:建立的核酸提取纯化三种方法中,硅质滤芯核酸RNA提取的纯度最高,其次是柱离心方法,再其次是磁珠法;建立的荧光PCR检测方法,在核酸25 copies/（?）L时可以检测,一个检测相当于250 copies,灵敏性高于市场荧光定量PCR一个测试300 copies或者500 copies的检测水平。建立的数字PCR检测方法,在核酸0.5 copies/（?）L时可以检出信号,灵敏度明显高于荧光PCR,最低检出限要低于荧光PCR。本文建立的荧光PCR检测方法和数字PCR检测方法临床对比验证结果表明,建立的荧光PCR方法与第三方检验机构的市售荧光PCR方法在384样本检测中都是阴性,符合率100%;建立的数字PCR检测方法与吉大一院的市售荧光PCR检测方法在197例环境样本中检测出7例阳性,人源样本136例中检测出9例阳性,符合率达100%,并且利用建立的数字PCR检测方法,检测出了荧光PCR检测方法无法检测的环境中微量病毒残留样本5例,说明数字PCR相比荧光PCR更加灵敏,对于微量病毒残留也可检测。本文建立的核酸提取方法,荧光PCR检测方法、以及新型的数字PCR检测方法,具有高灵敏度、高特异性、快速检测的优势。对于开发检测疑似新型冠状病毒患者、早期感染患者、以及环境中微量病毒样本的检测试剂,提供实验及方法学基础。
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