【摘 要】
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精子蛋白17(spermprotein17,Sp17)是一种高度保守的睾丸特异性蛋白,参与精子的顶体反应,促进受精过程。人体其他正常组织和细胞极少表达Sp17。近年来发现该蛋白基因在一些恶性肿
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精子蛋白17(spermprotein17,Sp17)是一种高度保守的睾丸特异性蛋白,参与精子的顶体反应,促进受精过程。人体其他正常组织和细胞极少表达Sp17。近年来发现该蛋白基因在一些恶性肿瘤组织中被激活并高水平表达。Sp17在正常组织中局限表达和在恶性肿瘤组织中异常表达,使其在肿瘤诊断中具有潜在价值,有望作为肿瘤诊断的辅助标志,尤其是对于女性肿瘤患者。为此,我们在mRNA水平初步检测Sp17在卵巢癌组织中表达,对人Sp17基因进行了克隆和原核表达,制备了抗Sp17单克隆抗体,并通过免疫组化法检测Sp17在卵巢原发上皮性癌和子宫内膜癌组织中表达情况,结果如下:
1.RT-PCR检测表明:13例原发卵巢癌组织中,11例表达Sp17mRNA,阳性率为84.6%,呈高水平表达;3例卵巢癌病人腹水,1例检出Sp17mRNA;13例其它肿瘤组织则阴性。
2.Sp17基因的克隆和原核表达。用RT-PCR法从人睾丸中扩增Sp17cDNA,并经过DNA测序证实。构建重组表达质粒pET-28a(+)/Sp17,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTAHis-Bind树脂纯化重组蛋白,并用飞行质谱仪检测分析其氨基酸序列。
3.Sp17特异性单克隆抗体制备。用重组hSp17免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得2个持续分泌抗体的杂交瘤细胞株(3C12和3D6)。ELISA测定腹水抗体滴度约为1∶105。2株mAb均能与睾丸组织或成熟精子中天然Sp17发生特异性结合反应。
4.免疫组化检测Sp17在妇科肿瘤组织中表达情况。卵巢原发上皮性癌组织31例中,13例表达Sp17,阳性率为42%;子宫内膜癌16例中,Sp17阳性11例,阳性率为68.7%;卵巢性索-间质肿瘤和生殖细胞瘤共7例,均未见表达Sp17。
以上研究结果提示Sp17可能成为卵巢癌诊断和子宫内膜癌的辅助标志。
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