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目的本实验研究旨在探讨骨碎补总黄酮(RDF)对环磷酰胺(CTX)诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的影响及其可能的作用机制,为骨碎补研究开发用于免疫调节提供实验依据。方法60只SPF级昆明种小鼠随机分为6组：正常对照组,CTX模型组,左旋咪唑组(LMS组,剂量为0.05g/kg),骨碎补总黄酮高、中、低剂量组(RDF-H、RDF-M和RDF-L组,剂量分别为0.8、0.4、0.2g/kg),每组10只,除正常对照组外,其余各组小鼠腹腔注射CTX建立免疫抑制小鼠模型。给药20天后,采血,处死小鼠,收集肝脏、脾脏和胸腺。分别检测小鼠的脾脏、胸腺指数；廓清指数K以及吞噬指数α；迟发型超敏反应和血清溶血素水平；全自动生化仪检测小鼠外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、淋巴细胞百分率(LYMPH%)、血小板计数(PLT)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)等；酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清IL-2、TNF-α、IFN-γ含量水平；比色法检测免疫抑制小鼠脾组织酸性磷酸酶(ACP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性；MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖反应；HE染色法观察小鼠脾组织病理切片；流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+T细胞数；实时荧光定量PCR (RT-PCR)法检测小鼠脾组织T-bet、 GATA-3、IFN-γ、IL-4 mRNA的表达。结果1.RDF对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响实验结果表明,CTX模型组小鼠的胸腺指数、脾脏指数、廓清指数K和吞噬指数α都明显低于正常对照组(P<0.01)；与CTX模型组相比较,LMS组和RDF-L、RDF-M、RDF-H组均显著提高免疫抑制小鼠的脾脏指数、廓清指数K和吞噬指数α, LMS组和RDF-M、RDF-H组均可提高免疫抑制小鼠的胸腺指数(P<0.05或P<0.01)。2.RDF对免疫抑制小鼠血液学指标的影响CTX模型组的WBC、RBC、HGB、LYMPH%、PLT、HCT显著低于正常对照组(P<0.01),RDW-SD比正常对照组高(P<0.01),其他指标MCHC、RDW-CV与正常对照组相比没有显著性差异；与CTX模型组比较,LMS组和RDF-L、RDF-M、RDF-H组均能明显提高CTX降低的WBC、 RBC、HGB、LYMPH%、PLT、HCT水平(P<0.05或P<0.01),各给药组对MCHC、RDW-SD、RDW-CV没有明显作用,差异没有统计学意义。3.RDF对免疫抑制小鼠血清溶血素水平、迟发型超敏反应、脾组织LDH和ACP活性的影响实验发现,CTX模型组小鼠的耳肿胀度、血清溶血素水平、LDH和ACP活性较正常对照组显著降低(P<0.05或P<0.01)；与CTX模型组比较,LMS组和RDF-H组可提高CTX降低的耳肿胀度,LMS组和RDF-M、 RDF-H组均可提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平和脾组织ACP活性,LMS组和RDF-L、RDF-M、RDF-H组均能明显提高脾组织LDH的活性水平(P<0.05或P<0.01)。4.RDF对免疫抑制小鼠血清细胞因子的影响ELISA试剂盒检测结果发现,CTX模型组的IL-2、TNF-α、IFN-γ含量都显著低于正常对照组(P<0.01)；与CTX模型组比较,LMS组和RDF-M、RDF-H组均都能明显升高免疫抑制小鼠血清IL-2和IFN-γ水平,LMS组和RDF-L、RDF-M、 RDF-H组均能明显提高免疫抑制小鼠血清TNF-α含量水平(P<0.05或P<0.01)。5.RDF对免疫抑制小鼠免疫细胞的影响实验发现,与正常对照组比较,CTX模型组的CD4+T细胞数、CD4+/CD8+比值、ConA诱导的T淋巴细胞增殖反应和LPS诱导的B淋巴细胞增殖反应均明显降低,而CD8+T细胞数明显升高(P<0.05或P<0.01)；与CTX模型组比较,LMS组和RDF-L、RDF-M、RDF-H组都可以提高CTX降低的CD4+T细胞数和ConA诱导的T淋巴细胞增殖反应,LMS组和RDF-L、RDF-M、RDF-H组都能降低CTX升高的CD8+T细胞数,LMS组和RDF-M、RDF-H组可以提高CD4+/CD8+比值(P<0.05或P<0.01),而各给药组对LPS诱导的B淋巴细胞增殖反应相对于模型组来说有提高作用但没有统计学意义。6.RDF对免疫抑制小鼠脾组织T-bet、GATA-3、IFN-γ、IL-4mRNA表达的影响RT-PCR结果发现,与正常对照组比较,CTX模型组的T-bet、IFN-γ mRNA的表达和T-bet/GATA-3、IFN-γ/IL-4比值都明显降低,而GATA-3、 IL-4 mRNA的表达明显升高(P<0.01)；与CTX模型组比较,LMS组和RDF-M、RDF-H组可提高T-bet mRNA的表达和T-bet/GATA-3比值,LMS组和RDF-L、RDF-M、RDF-H组可提高CTX降低的IFN-γ mRNA的表达和IFN-γ/IL-4比值,LMS组和RDF-L、RDF-M、RDF-H组可降低CTX升高的GATA-3、IL-4 mRNA的表达,(P<0.05或P<0.01)。结论RDF可提高免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾脏指数,巨噬细胞吞噬功能,脾组织LDH和ACP活性；提高血液中WBC、RBC、HGB、LYMPH%、 PLT、HCT水平,血清溶血素水平以及迟发型超敏反应；提高血清IL-2、TNF-α、IFN-γ水平和脾脏T淋巴细胞增殖反应,提高外周血中CD4+T细胞数和CD4+/CD8+比值；对Th1/Th2亚群有调节作用,这可能是通过提高脾脏T-bet、IFN-γ mRNA的表达和降低GATA-3、IL-4 mRNA的表达来实现的。本研究结果提示RDF可能是通过保护或增强免疫抑制小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能来改善其免疫功能,拮抗因环磷酰胺而引起的免疫抑制或免疫低下状态。